Generating DNA Probes to Label the Sex Chromosomes of Anopheles Mosquitoes and Preparing the Hybridization Solution

상업용 추출 키트를 사용하여 번데기 또는 성인 수컷 Anopheles 모기에서 게놈 DNA를 추출하는 것으로 시작합니다. 다음으로, PCR 반응 혼합물을 준비한다. PCR 반응을 수행하여 18 SR-DNA 및 위성 AGY 53B를 표지합니다.

혼성화 용액의 준비를 위해 5 마이크로리터의 표지된 DNA 프로브를 1.5밀리리터 튜브에 추가합니다. 그런 다음 연어 정자 DNA 5마이크로리터를 추가합니다. 100% 에탄올 2 부피와 3몰 아세트산 나트륨 0.1 부피를 추가하여 DNA 프로브를 침전시킵니다.

섭씨 영하 20도에서 최소 2.5시간 동안 보관하십시오. 17, 4 섭씨 온도에 20 분 동안 000 G에 관을 분리하십시오. 그런 다음 에탄올을 제거하고 펠릿을 어두운 어두운 실온에서 20분 동안 자연 건조합니다.

다음으로, 1.5 밀리리터 튜브에 혼성화 완충액을 준비합니다. 용액을 1분 동안 와류시키고 덱스트란 황산염을 섭씨 37도에서 30분 동안 용해시킵니다. 혼성화 용액을 얻기 위해, DNA 팔레트를 20 내지 30 마이크로리터의 혼성화 완충액에 용해시킨다.

1분 동안 용액을 소용돌이치게 합니다. 빠르게 회전하고 튜브를 섭씨 37도의 어둠 속에서 보관하십시오.