Name: Anopheles Mosquito Testis Dissection and Hybridisation (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-05-26T12:25:00
Duration: 2 min 35 s
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anopheles mosquito testis dissection and hybridisation

Whole-Mount Fluorescence In Situ Hybridization to Study Spermatogenesis in the Anopheles Mosquito

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Anopheles Mosquito Testis Dissection and Hybridisation (Video) | JoVE 

Anopheles Disección e hibridación de testículos de mosquitos

Comience por extirpar al menos 20 testículos de las pupas de mosquitos Anopheles en PBS estériles. Transfiera los testículos a un portaobjetos de microscopio limpio que contenga una gota fresca de PBS. Usando puntas filtradas P1000 o la punta de una aguja de disección, transfiera los testículos a una placa embrionaria que contenga 3.7% de formaldehído en PBST.Incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente. A continuación, lave los testículos en PBST durante cinco minutos a temperatura ambiente. Transfiera los testículos a la placa de embriones que contiene RNasa A e incube durante media hora a 37 grados centígrados.Retire la solución de ARN y agregue un mililitro de la solución penetrante. Incubar los testículos en la solución penetrante a temperatura ambiente durante 10 minutos. A continuación, lave los testículos y el PBST dos veces durante cinco minutos cada uno.Transfiera los testículos a un tubo de 1,5 mililitros que contenga de 20 a 30 microlitros de solución de hibridación con la sonda de ADN marcada. Incubar la mezcla durante la noche a 37 grados centígrados en la oscuridad para permitir la hibridación. Con la ayuda de la punta filtrada AP 1000 de orificio blanco, transfiera los testículos a una placa de embriones, luego lávelos en dos XSSC durante cinco minutos.Retire el SSC y luego monte los testículos en un portaobjetos de vidrio esmerilado utilizando un medio de montaje disponible comercialmente que contenga DAPI. Selle el portaobjetos con un sellador de cubreobjetos e incube a temperatura ambiente en la oscuridad durante dos horas. Un buen nivel de hibridación permitió la visualización de los cromosomas diana a lo largo de la espermatogénesis.El emparejamiento de los cromosomas sexuales marcados se pudo ver en las etapas prebiótica y miótica. Las espermátidas portadoras de X o Y podrían seguirse a lo largo de la espermiogénesis marcada por diferentes niveles de condensación del ADN hasta el paso final de los espermatozoides maduros en forma de flecha.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Anopheles Mosquito Testis Dissection and Hybridisation

Fluorescence In Situ Hybridization to Study Mosquito Spermatogenesis

Whole-Mount Fluorescence In Situ Hybridization to Study Spermatogenesis in the Anopheles Mosquito (Video) | JoVE 

Spermatogenesis is a complex biological process during which diploid cells undergo successive mitotic and meiotic division followed by large structural ...

Investigación

Inmunología e Infección

Generating DNA Probes to Label the Sex Chromosomes of Anopheles Mosquitoes and Preparing the Hybridization Solution

Generating DNA Probes to Label the Sex Chromosomes of Anopheles Mosquitoes and Preparing the Hybridization Solution (Video) | JoVE 

Generación de sondas de ADN para marcar los cromosomas sexuales de mosquitos Anopheles y preparación de la solución de hibridación