Efter att ha ställt in den virtuella trumman och videooculografin, fixera djurets huvud på en anpassad stage. Justera huvudets lutning så att vänster och höger öga är i nivå och ögonens näs- och tinningshörn är inriktade horisontellt. Överför scenen med det huvudfixerade djuret till mitten av inhägnaden som bildas av de tre monitorerna.
Öppna eyetracking-programmet och klicka på Free run. Klicka sedan på Kör för att slå på kameran. Justera positionen för det högra ögat tills det visas i mitten av videon.
Vrid kameraarmen till den vänstra yttersta änden. Flytta sedan djurets högra ögonposition manuellt på horisontalplanet vinkelrätt mot den optiska axeln med finjustering av 2D-translationssteget tills X-hornhinnans reflektion är i bildens horisontella mitt. Vrid nu kameraarmen till den andra änden, och om X-hornhinnans reflektion går bort från mitten av bilden, flytta höger öga längs den optiska axeln med finjusteringen tills X-hornhinnereflektionen kommer till mitten.
Upprepa flera gånger tills X-hornhinnans reflektion stannar i mitten när kameraarmen svänger åt vänster och höger. Klicka på knappen Kalibrering och sedan på knappen Kör. Slå på lysdioden för Y-hornhinnans reflektion och spela in dess position på videon.
Växla sedan till lysdioden för reflektion av X-hornhinnan och registrera dess position. För att mäta pupillrotationsradien, vrid kameraarmen till vänster ände. Spela in positionerna för pupillen och X-hornhinnans reflektion på videon genom att högerklicka med musen och vrid sedan kameraarmen till höger ände.
Spela in pupillens positioner och X-hornhinnans reflektion på videon. Baserat på de registrerade värdena, beräkna pupillrotationsradien, Rp, med hjälp av denna formel. För att utveckla förhållandet mellan pupillrotation och pupilldiameter, justera bildskärmarnas luminans från 0 till 160 candela per kvadratmeter för att kontrollera pupillstorleken, och registrera pupilldiametern för varje luminansvärde.
För varje luminansvärde mäts pupillrotationsradien 8 till 10 gånger och pupillens diameter registreras. Använd sedan linjär regression för att analysera förhållandet mellan pupillrotationsradien, Rp och pupilldiametern, och för att härleda lutningen och skärningspunkten för den linjära modellen.