Name: Image Acquisition and Analysis for the Detection of Autophagy Protease ATG4B Using Luciferase Assay (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-06-30T12:10:00
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image acquisition and analysis for the detection of autophagy protease atg4b using luciferase assay

Cell-Based Drug Screening for Inhibitors of Autophagy Related 4B Cysteine Peptidase

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Image Acquisition and Analysis for the Detection of Autophagy Protease ATG4B Using Luciferase Assay (Video) | JoVE 

荧光素酶检测自噬蛋白酶ATG4B的图像采集与分析

首先启动显微镜操作软件。在设置选项卡下，选择正确的预定义板类型。按弹出键进入板载物台定位板，然后按加载键将板加载到显微镜中。接下来，选择数值孔径为 20 倍的空气物镜 0.4。调整 20 倍空气物镜的校正环，以适应所选板类型的板厚度。将通道选择设置为 Hoechst 33342，并调整 Hoechst 通道的成像参数。通过在板内选择一个代表孔来测试所选设置。在定义的布局上，选择所有板孔和字段。然后在在线作业下选择相应的文件夹，将数据传输到在线分析软件。实验设置已保存。在运行实验选项卡下，将要成像的板命名，并开始成像过程。要开始图像分析，首先启动软件，选择要分析的图像，然后单击图像分析选项卡以开始图像分割。接下来，单击输入图像选项卡中的加号以添加新的构建块。从列表中，单击查找原子核。检查图像上的分割对象后，选择最合适的分割方法。在分割方法中调整检测参数。单击“定义结果”，然后选择“标准输出”作为方法。单击“将分析保存到数据库”以保存分析管道。在“批量分析”选项卡下，单击已保存的管道，该管道将显示在“方法”选项下。然后选择要分析的数据。通过单击“开始分析”开始分析以生成细胞数数据集来开始分析。所描述的基于细胞的测定依赖于间接反映 ATG4B 活性变化的报告基因读数，从而能够检测 ATG4B 活性的抑制剂和激活剂。每种化合物的ATG4B活性与其细胞活力的比率用作鉴定ATG4B抑制剂的临界值。大于 1 的比率表示可能的 ATG4B 激活剂，小于 1 的比率表示可能的 ATG4B 抑制剂。

Research

JoVE Journal

Biology

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High-Throughput Screening Analysis for 4B Cysteine Peptidase Autophagy Inhibitor

A Selective Luciferase-Based Assay for Monitoring ATG4B 27 Activity in Cells (Video) | JoVE

基于细胞的自噬相关 4B 半胱氨酸肽酶抑制剂的药物筛选

Growing evidence has shown that high autophagic flux is related to tumor progression and cancer therapy resistance. Assaying individual autophagy proteins ...

科研

生物学

Autophagy Protease Tag-Compound Addition and Cellular Supernatant Harvest for Drug Screening

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自噬蛋白酶标签化合物添加和细胞上清液收获用于药物筛选

Luciferase Assay for the Detection of Autophagy Protease ATG4B

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荧光素酶检测自噬蛋白酶ATG4B