Gastric Fluid Sampling, DNA Extraction, and qPCR for H. pylori Detection and its Antibiotic Resistance

시작하려면 환자에게 샘플 수집 전에 밤새 금식하도록 지시하십시오. 다음날 스트링 테스트 키트를 엽니다. 캡슐을 잡고 끈 끝에서 고리를 잡습니다.

끈을 환자의 뺨에 테이프로 붙입니다. 그런 다음 환자가 캡슐을 목구멍 뒤쪽의 혀에 놓고 물 한 모금과 함께 삼키도록 안내합니다. 캡슐이 환자의 위장에 한 시간 동안 용해 된 후 숙련 된 조수에게 환자에게서 끈을 조심스럽게 빼내도록 지시하십시오.

다음으로, TSE 샘플 보존 용액에 위액에 담근 끝을 놓고 끈의 하단을 잘라냅니다. 수집 튜브를 운반하는 라벨이 붙은 시편을 시험관 랙에 놓고 10초 동안 소용돌이칩니다. 32웰 플레이트를 여러 번 거꾸로 뒤집어 마그네틱 비드를 다시 매달고 10초 동안 소용돌이칩니다.

그런 다음 플레이트에서 알루미늄 호일 천장을 조심스럽게 제거합니다. 각 샘플에서 200마이크로리터의 위액과 양성 대조군인 헬리코박터 파일로리 DNA를 별도의 웰로 옮깁니다. DNA 추출 및 확인 후 자동 DNA 추출을 위해 핵산 추출기 기계의 해당 샘플 슬롯에 32웰 플레이트를 놓습니다.

과잉 위액과 추출된 DNA 샘플을 섭씨 영하 20도에 두어 사용할 때까지 qPCR 반응 혼합물을 얼음 위에서 해동하고 시약 손실을 방지하기 위해 플릭 및 스핀으로 혼합합니다. 32웰 플레이트의 각 샘플에 대해 PCR 반응 혼합물 20마이크로리터를 요소 정방향 및 역방향 프라이머와 혼합하고, 요소 프로브 및 추출된 DNA 5마이크로리터. 플레이트를 qPCR 기계에 놓고 열 순환기 프로그램을 설정합니다. 형광 신호 획득을 FAM으로 설정하여 데이터 수집, 증폭 연장 기간으로 설정하고 반응이 완료되면 실행을 시작합니다.

분석을 위해 데이터를 저장합니다. 기기가 기준선 임계값을 자동으로 선택하므로 qPCR을 위한 특수 소프트웨어로 데이터를 분석합니다. h에 대한 테스트 결과의 경우.

pylori는 양성이며 시약 키트를 h. pylori 키트의 23S rRNA 유전자 및 gyrA 유전자 돌연변이에 대한 검출 시약으로 교체하고 샘플에 대한 약물 내성 테스트를 시작합니다. 이 연구는 h의 검출을 보여줍니다.

qPCR에 의한 위액의 pylori 및 항생제 내성. h. pylori 양성 샘플 중.

S2는 클래리스로마이신과 레보플록사신에 대한 이중 내성을 나타내는 검출 범위 내에서 CT 값을 가졌습니다. S3 CT 값은 헬리코박터 파일로리 감염 및 레보플록사신 내성에 대한 검출 내에 있었지만 레보플록사신 내성을 나타내는 클래리스로마이신 내성에 대해서는 검출되지 않았습니다.

유사하게, S4는 헬리코박터 파일로리 감염 및 클래리스로마이신 내성에 대해 검출 가능한 CT 값을 가졌지만 클래리스로마이신 내성을 시사하는 레보플록사신 내성에 대해서는 검출 가능한 CT 값을 가지지 않았습니다. S5는 h에 대해서만 검출 가능한 CT 값을 가졌습니다.

파일로리 감염은 두 항생제 모두에 대한 민감성을 나타내며 두 약물 중 하나로 치료할 수 있습니다.