Vezikül zarını boyamak için, floresan lipit boyası FM4-64'ü saflaştırılmış veziküllere iki mikromolar'ın son konsantrasyonunda ekleyin ve görüntülemeden önce 10 dakika boyunca inkübe edin. Protein dolu vezikülleri Escherichia coli kültüründen izole ettikten sonra, saflaştırılmış vezikülleri, temiz bir cam slayt oluşturmasına ve yerleştirmesine izin verilen bir milimetreden daha ince dairesel% 2 LB agaroz pedine pipetleyin. Sıvı kuruduktan sonra, peddeki veziküllerin üzerine 50 milimetre x 25 milimetrelik bir kapak kayması yerleştirin.
Kapak kaymasını ara parçalar ve yapışkan bantla yerinde tutun. Ardından, bir yağ daldırma hedefi kullanarak slaytı ters çevrilmiş bir mikroskop üzerine monte edin ve numuneyi yerleşmesi ve sıcaklığın dengelenmesi için iki ila üç dakika bekletin. Tek kareli görüntülerde, donanıma bağımlı rastgele arka plan gürültüsünü azaltmak için üç görüntü ortalaması kullanın.
Hızlandırılmış görüntüleme için, tek tek kareler arasında üç ila beş dakika bekleyin. Geniş alan floresan mikroskobu görüntülemesinde saflaştırılmış amniyon yeşili içeren veziküller görüldü. Lipofilik floresan boya, FM4-64, vezikül membranlarının varlığını doğruladı.
İç zar proteini CydB'yi eksprese eden canlı bakteri hücrelerinin yapılandırılmış aydınlatma mikroskopisi, amniyon yeşili ile kaynaşmış ve VNp6-mCherry2, vezikül üretimi ve kargo yerleştirme gösterdi.
