للبدء ، خذ حبيبات GFP-HUVECs المزروعة إلى مستوى التقاء من 80 إلى 100٪ وأعد تعليق الخلايا في حجم مناسب من الوسط القاعدي لتحقيق تركيز واحد في 10 إلى الخلايا السابعة لكل ملليلتر من محلول المخزون. إعداد أنابيب طرد مركزي مخروطية 50 ملليلتر تحتوي على الحجم المطلوب من الوسط القاعدي المكمل بعوامل النمو المعنية. أضف GFP-HUVECs من محلول المخزون بتخفيف من واحد إلى 66.67 لتحقيق تركيز 1.5 في 10 إلى الخلايا الخامسة لكل ميكرولتر.
ثم قم باستنشاق الوسط من اللوحة التي تحتوي على الزراعة الأحادية اللحمية وأضف 200 ميكرولتر لكل بئر من تعليق GFP-HUVECs المحضر. احتضان عند 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب ، وتغيير الوسط كل ثلاثة إلى أربعة أيام. مراقبة تطور الثقافة بواسطة المجهر الساطع والفلوري باستخدام هدف خمس مرات.
يمكن ملاحظة الاختلافات بين الثقافات من صور المجال الساطع والفلوري التي تظهر فقط GFP-HUVECs. بدت الثقافات أقل تطورا دون أي عامل نمو ، ومع ذلك ، لوحظ تطور أسرع في وجود FGF-2. في المقابل ، أظهرت صور المجال الساطع الثقافات الأكثر كثافة في وجود BMP-2.
ومع ذلك ، تم تشكيل شبكات شبيهة بالأوعية الدموية في كل من الظروف المحتوية على عامل النمو والشبكات الأكثر شمولا وترابطا مع FGF-2.
