بعد إنشاء الاستزراع المشترك للخلايا البطانية اللحمية ، احصل على إشارة GFP من GFP huvec باستخدام المجهر الفلوري مع إعدادات مناسبة للقياس الكمي. قم بمعالجة جميع الصور التي تم الحصول عليها في نفس اليوم مسبقا لتحسين التباين بشكل أكبر. في حالة استخدام fiji أو image J ، افتح جميع صور قناة GFP المحسنة في نفس النقطة الزمنية وافتح قائمة السطوع والتباين.
حدد صورة تمثل حالة وسيطة واضبط التباين تلقائيا عن طريق تحديد تلقائي. انقر فوق تعيين وحدد نشر لجميع الصور المفتوحة الأخرى. قم بتقييم ما إذا كان النطاق المحدد تلقائيا يناسب جميع صور النقطة الزمنية الحالية.
إذا لزم الأمر، قم بإعادة ضبط النطاق وإعادة نشره يدويا على جميع الصور واحفظ الصور المعدلة كملفات TIFF. بعد ذلك ، قم بتطبيق مرشح طمس متوسط على جميع الصور. قم بتقليل الحجم عن طريق تجميعها وحفظها كملفات TIFF بلون RGB بتدرج رمادي في مجلد للقياس الكمي.
يمكن القيام بذلك يدويا أو في وضع الدفعات باستخدام وحدات الماكرو. قم بتحليل جميع الصور التي تم إنشاؤها باستخدام وضع عملية الدفعات في محلل تكوين الأوعية للصورة J.ثم تحقق من صحة نتائج القياس الكمي من خلال فحص تراكبات الهياكل المعترف بها والصور الأصلية. اضبط معلمات المعالجة المسبقة ، أو أعد تحليل الصور الأصلية ، أو استبعد المناطق التي بها مشكلات إذا اكتشفت الخوارزمية هياكل اصطناعية بها عدد قليل من الخلايا المرئية أو معدومة في الصورة الأصلية.
أخيرا ، قم بتطبيع القيم التي تم الحصول عليها إلى مساحة ملليمتر مربع واحد بضرب قيم كل عينة بنسبة المنطقة التي تم تحليلها إلى ملليمتر مربع واحد. أظهرت المعلمات الكمية لشبكات HUVEC GFP أن الطول الإجمالي للشبكة كان الأعلى في وجود FGF-2 والأدنى في غياب عوامل النمو. اتبع عدد التقاطعات التي تشير إلى نقاط التفرع في الشبكات نفس اتجاه الطول الإجمالي.
وعلى العكس من ذلك، تميز كلا عاملي النمو بعدد أقل بكثير من القطاعات المعزولة مما يشير إلى ترابط أعلى من الحالة دون أي عامل نمو.
