Stromal endotel hücre ko-kültürünü kurduktan sonra, GFP huvec'ten GFP sinyalini, nicelleştirmeye uygun ayarlarla floresan mikroskobu kullanarak elde edin. Kontrastı daha da artırmak için aynı gün elde edilen tüm görüntüleri önceden işleyin. Fiji veya görüntü J kullanıyorsanız, tüm gelişmiş GFP kanal görüntülerini aynı anda açın ve parlaklık ve kontrast menüsünü açın.
Ara koşulu temsil eden bir görüntü seçin ve otomatik seçeneğini belirleyerek kontrastı otomatik olarak ayarlayın. Ayarla'yı tıklayın ve diğer tüm açık görüntülere yay'ı işaretleyin. Otomatik olarak seçilen aralığın geçerli zaman noktasının tüm görüntülerine uyup uymadığını görsel olarak değerlendirin.
Gerekirse, aralığı el ile yeniden ayarlayın ve tüm görüntülere yeniden yayınlayın ve ayarlanan görüntüleri TIFF dosyaları olarak kaydedin. Ardından, tüm görüntülere medyan bulanıklık filtresi uygulayın. Gruplama yaparak boyutu küçültün ve nicelleştirme için bir klasöre gri tonlamalı RGB renkli TIFF dosyaları olarak kaydedin.
Bu, makrolar kullanılarak el ile veya toplu iş modunda yapılabilir. J görüntüsü için anjiyogenez analizöründeki toplu işlem modunu kullanarak oluşturulan tüm görüntüleri analiz edin.Ardından, tanınan yapıların ve orijinal görüntülerin bindirmelerini inceleyerek niceleme sonuçlarını doğrulayın. Ön işleme parametrelerini ayarlayın, orijinal görüntüleri yeniden analiz edin veya algoritma orijinal görüntüde çok az hücrenin göründüğü veya hiç hücrenin görünmediği yapay yapılar algılarsa sorunlu alanları hariç tutun.
Son olarak, her bir numunenin değerlerini, analiz edilen alanın bir milimetre kareye oranı ile çarparak elde edilen değerleri bir milimetre karelik bir alana normalleştirin. GFP huvec ağlarının nicel parametreleri, toplam ağ uzunluğunun FGF-2 varlığında en yüksek ve büyüme faktörlerinin yokluğunda en düşük olduğunu göstermiştir. Ağlardaki dallanma noktalarını gösteren kavşak sayısı, toplam uzunlukla aynı eğilimi izledi.
Tersine, her iki büyüme faktörü de, herhangi bir büyüme faktörü olmayan durumdan daha yüksek karşılıklı bağlanabilirlik gösteren önemli ölçüde daha az izole segmente sahipti.
