Name: Yeast Cell Culture and Cell Harvesting for Single-Copy Gene Locus Chromatin Purification (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-11-17T13:20:00
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yeast cell culture and cell harvesting for single-copy gene locus chromatin purification

Single-Copy Gene Locus Chromatin Purification in Saccharomyces cerevisiae

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Yeast Cell Culture and Cell Harvesting for Single-Copy Gene Locus Chromatin Purification (Video) | JoVE 

खमीर सेल संस्कृति और एकल प्रतिलिपि जीन स्थान क्रोमेटिन शुद्धि के लिए सेल कटाई

YPD प्लेटों से YPR माध्यम के पांच मिलीलीटर में नियंत्रण और पुनर्संयोजन सक्षम खमीर उपभेदों को टीका लगाकर शुरू करें, और 30 डिग्री सेल्सियस और 200 RPM पर रातोंरात संस्कृति को विकसित करें। इसके बाद, दो मिलीलीटर को 100 मिलीलीटर ताजा वाईपीआर माध्यम में टीका लगाकर और इसे रात भर 30 डिग्री सेल्सियस और 200 आरपीएम पर बढ़ाकर संस्कृति को बढ़ाएं। प्रत्येक तनाव के लिए, 1, 800 मिलीलीटर आटोक्लेव खमीर पेप्टोन मध्यम, और 200 मिलीलीटर आटोक्लेव 20% रैफिनोज समाधान को दो 5 लीटर एर्लेनमेयर फ्लास्क में वितरित करें।संबंधित माध्यम में 600 नैनोमीटर पर 0.2 ऑप्टिकल घनत्व के साथ प्रत्येक खमीर तनाव को टीका लगाएं, और 200 आरपीएम पर लगभग छह घंटे तक या कोशिकाओं को वांछित 1.0 ऑप्टिकल घनत्व तक पहुंचने तक इनक्यूबेट करें। G1 चरण में कोशिकाओं को गिरफ्तार करने के लिए एक साथ 2% गैलेक्टोज के 200 मिलीलीटर और खमीर संभोग कारक अल्फा या वाईएमएफए के 110 माइक्रोलीटर जोड़ें और इसे दो घंटे तक इनक्यूबेट करें। सेल निलंबन को एक लीटर अपकेंद्रित्र बाल्टी में स्थानांतरित करें और बाल्टी को 6, 000 ग्राम और 10 मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर अपकेंद्रित्र करें।सतह पर तैरनेवाला त्यागें और आसुत जल के 10 से 15 मिलीलीटर में सेल छर्रों resuspend. इसके बाद, एक 25 मिलीलीटर सिरिंज को एक लालच प्लग के साथ सील करें और इसे पानी से भरी 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब के अंदर रखें। सेल निलंबन को सिरिंज असेंबली में स्थानांतरित करें।शेष कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए आसुत जल के पांच मिलीलीटर के साथ अपकेंद्रित्र बाल्टी धो लें। फिर, कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए 2, 397 जी पर विधानसभा अपकेंद्रित्र और सतह पर तैरनेवाला त्यागें. फिर सिरिंज से लालच प्लग निकालें और सेल स्पेगेटी बनाने के लिए कोशिकाओं को तरल नाइट्रोजन में बाहर निकालें।अंत में, जमे हुए सेल स्पेगेटी को 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करें और इसे आगे उपयोग तक शून्य से 80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Yeast Cell Culture and Cell Harvesting for Single-Copy Gene Locus Chromatin Purification

Locus-Specific Chromatin Isolation from Yeast Cells

Advancing Chromatin Research and Overcoming Limitations with a High-Enrichment Locus-Specific Chromatin Isolation Protocol (Video) | JoVE

Saccharomyces cerevisiae में सिंगल-कॉपी जीन लोकस क्रोमैटिन शुद्धि

The basic organizational unit of eukaryotic chromatin is the nucleosome core particle (NCP), which comprises DNA wrapped ~1.7 times around a histone ...

Locus-Specific Chromatin Purification from Saccharomyces cerevisiae

Locus-Specific Chromatin Purification from Saccharomyces cerevisiae (Video) | JoVE 

स्थान-विशिष्ट क्रोमैटिन शुद्धिकरण Saccharomyces cerevisiae से

TEV Protease-Mediated Elution and Denaturation Elution of the Chromatin Locus Purified from Saccharomyces cerevisiae

TEV Protease-Mediated Elution and Denaturation Elution of the Chromatin Locus Purified from Saccharomyces cerevisiae (Video) | JoVE 

TEV प्रोटीज़-मध्यस्थता क्षालन और क्रोमैटिन लोकस का विकृतीकरण क्षालन Saccharomyces cerevisiae से शुद्ध