Name: Dissection of Drosophila melanogaster Third Instar Larval Brain for Live-Cell Imaging (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-06-23T12:40:00
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dissection of drosophila melanogaster third instar larval brain for live-cell imaging

Live-Cell Imaging of Drosophila melanogaster Third Instar Larval Brains

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Dissection of Drosophila melanogaster Third Instar Larval Brain for Live-Cell Imaging (Video) | JoVE 

Disección del cerebro larvario de Drosophila melanogaster Third Instar para imágenes de células vivas

Comience pipeteando alrededor de 400 microlitros de disección y medio de imagen en cada pocillo de un plato de disección de tres pocillos. Trabajando bajo un microscopio de disección, lave las larvas experimentales en disección y medio de imagen para eliminar los residuos de alimentos. Mientras continúa trabajando bajo el microscopio de disección, sostenga las larvas por los ganchos bucales con un juego de pinzas.Con otro juego de pinzas, corte cuidadosamente aproximadamente 1/3 de la larva del lado posterior. Luego, mientras sostiene la larva por los ganchos bucales usando un juego de pinzas, use el otro juego de pinzas para cepillar suavemente la cutícula hacia los ganchos bucales. Simultáneamente, empuje hacia adentro con las pinzas que sostienen los ganchos bucales hasta que toda la larva esté al revés.Invierta la larva para exponer el sistema nervioso central y otros tejidos mientras mantiene su conexión con la cutícula. Localice el sistema nervioso central, o SNC, para evitar la eliminación accidental. Retire suavemente los tejidos que no son del SNC con pinzas, manteniendo solo el SNC y el cerebro unidos a la cutícula.Para liberar el cerebro de la cutícula cortando las conexiones axonales, usando tijeras de microdisección, corte suavemente debajo de los lóbulos cerebrales. Luego, corte las conexiones debajo del cordón nervioso ventral. Diseccionar las larvas en lotes para mantener el tiempo de disección por debajo de 20 minutos.Transfiera el cerebro diseccionado a un pocillo que contenga la disección y el medio de imagen. Para obtener imágenes que duren más de tres horas, complemente el medio con cuerpos gordos.

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