Name: Generation of Rat Intestinal 2D Monolayers from 3D Organoids (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-06-23T12:55:00
Duration: 2 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Rat Intestinal 2D Monolayers from 3D Organoids at JoVE.com

generation of rat intestinal 2d monolayers from 3d organoids

Generation and Manipulation of Rat Intestinal Organoids

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Rat Intestinal 2D Monolayers from 3D Organoids at JoVE.com

Generation of Rat Intestinal 2D Monolayers from 3D Organoids (Video) | JoVE 

3 डी ऑर्गेनोइड्स से चूहे आंतों 2 डी मोनोलेयर की पीढ़ी

ईएमई के साथ प्लेट को कोट करने के लिए, कोलेजन के साथ कोटिंग के लिए ठंडे उन्नत डीएमईएम + कोटिंग में ईएमई 1 से 20 को पतला करें, उन्नत डीएमईएम + में कोलेजन आई के पांच मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर को 100 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर तक पतला करें। 200 माइक्रोलीटर पतला ईएमई या कोलेजन के साथ प्लेट के साथ कोट करें ताकि अच्छी तरह से सतह को पूरी तरह से कवर किया जा सके और 37 डिग्री सेल्सियस पर एक से दो घंटे तक इनक्यूबेट किया जा सके। मोनोलेयर उत्पन्न करने के लिए, ऑर्गेनोइड्स युक्त 35 मिलीमीटर प्लेट से मीडिया को एस्पिरेट करें।एक मिलीलीटर पीबीएस जोड़ें और पी 1000 टिप के साथ कुओं में ईएमई को बाधित करें, सभी ईएमई को ढीला करने के लिए लगभग 20 बार ऊपर और नीचे करें। सामग्री को 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करें। अतिरिक्त ऑर्गेनोइड ्स इकट्ठा करने और उन्हें उसी शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करने के लिए प्लेट में एक मिलीलीटर पीबीएस जोड़ें।दो मिनट के लिए 350 ग्राम पर नमूने को सेंट्रीफ्यूज करें और किसी भी ईएमई अवशेष सहित सतह पर तैरने वाले को हटा दें। फिर, ऑर्गनॉइड गोली में एक मिलीलीटर ट्रिप्सिन घोल जोड़ें और दो मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। पी 1000 टिप का उपयोग करके 10 बार ऊपर और नीचे पिपेट करें और ट्रिप्सिन को बेअसर करने के लिए उन्नत डीएमईएम + के दो मिलीलीटर जोड़ें।पांच मिनट के लिए 350 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें और 4.8 मिलीलीटर आरआईओएम 2 डी में गोली को निलंबित करने से पहले सुपरनेंट को एस्पिरेट करें। कुओं से उन्नत डीएमईएम + में अतिरिक्त ईएमई या कोलेजन को हटा दें। फिर, प्रत्येक प्री-लेपित अच्छी तरह से आरआईओएम 2 डी में 200 माइक्रोलीटर ऑर्गेनोइड और 10 माइक्रोमोलर वाई 27632 जोड़ें।4 से 16 घंटे के बाद, मीडिया इकट्ठा करें और एक मिनट के लिए 1,000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें। सतह पर तैरनेवाला को एक नई 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में स्थानांतरित करें और गोली को छोड़ दें। प्रत्येक कुएं में 200 माइक्रोलीटर सेंट्रीफ्यूज ्ड आरआईओएम 2 डी जोड़ने से पहले प्रत्येक को 300 माइक्रोलीटर पीबीएस के साथ अच्छी तरह से धो लें।हर दो से तीन दिनों में आरआईओएम 2 डी को बदलें, ईएमई पर चढ़ाए गए वाई 27632.2 डी मोनोलेयर के उपयोग को निलंबित करते हुए ईएमई को आसानी से छोटे स्फेरॉइड में सुधार दिया गया जब ईएमई को कोशिकाओं के शीर्ष पर वापस जोड़ा गया। इसके विपरीत, एक कोलेजन आई सब्सट्रेट 3 डी संरचनाओं में सुधार के लिए अपर्याप्त था।

Research

JoVE Journal

Biology

Generation of Rat Intestinal 2D Monolayers from 3D Organoids

Rat Intestinal Crypts Isolation and Intestinal Organoids Generation

Generation and Manipulation of Rat Intestinal Organoids (Video) | JoVE 

चूहे आंतों के ऑर्गेनोइड्स का उत्पादन और हेरफेर

When using organoids to assess physiology and cell fate decisions, it is important to use a model that closely recapitulates in vivo contexts. ...

Establishment and Passaging of Small Intestine Organoids

Establishment and Passaging of Small Intestine Organoids (Video) | JoVE 

छोटी आंत ऑर्गेनोइड्स की स्थापना और पासिंग