התחילו בהכנת כל הריאגנטים לפני הניסוי והפשירו את מטריצת קרום המרתף על קרח. לאחר מכן להכין את המדיום monolayer murine. לדלל את קרום המרתף המופשר אחד עד 20 עם מדיום מורין חד שכבתי קר, ולשמור אותו על קרח.
מניחים תוספת תרבית תאים שקופה בגודל 0.4 מיקרומטר, באמצעות מלקחיים סטריליים, לבאר אחת מתוך צלחת תרבית רקמה בת 24 בארות. תפוס חוט פינתי של האינסרט והעבר אותו לבאר. חזור על הפעולה עד שהמספר המתאים של תוספות תרבית תאים יהיה זמין לתרבית.
כדי לכסות את פני השטח האפי של כל תוספת תרבית תאים במטריצת קרום מרתף מדוללת, מקם את קצה פיפטת P 200 במרכז העלון ומוציא מטריצת 150 מיקרוליטר. לאחר מכן, מעבירים את הצלחת לאינקובטור סטרילי של 37 מעלות עם 5% פחמן דו חמצני, למשך שעה לפחות. בסוף הדגירה, סובבו את צלחת 24 הבאר בזווית של 45 מעלות.
הנח אצבע אחת על פינת השיניים כדי לייצב את ההכנסה. הניחו בעדינות את קצה פיפטת P 200 לאורך הצד התחתון של התוספת והסירו את מטריצת המרתף. הסר את השאריות העודפות על ידי שטיפת כל תוספת תרבית תאים עם 150 מיקרוליטר DPBS סטרילי ללא יוני סידן או מגנזיום ואפשר להם להתייבש בארון בטיחות ביולוגי למשך 10 דקות לפחות.
לאחר ייבוש התוספות, מוסיפים 400 מיקרוליטר של המדיום החד-שכבתי של מורין לתחתית, ו-75 מיקרוליטר על גבי תוספת תרבית התא. חזור על הפעולה עד שכל תוספות תרבית התאים שקועות. השאירו את הצלחת בארון הבטיחות הביולוגי או באינקובטור עד לצורך.
לאחר מכן הסר את צלחת 24 הבאר של קולונואידי מעיים בוגרים מהאינקובטור והנח אותו מתחת לארון הבטיחות הביולוגי. שאפו את המדיום באמצעות קצוות סטריליים ושטפו היטב כל אחד עם מיליליטר אחד של DPBS סטרילי בטמפרטורת החדר. באמצעות קצוות סטריליים, להסיר את DPBS ללא סידן או יוני מגנזיום.
לעכל כל תקע של מטריצת קרום המרתף על ידי הוספת 500 מיקרוליטר של מגיב דיסוציאציה אנזימטי בכל באר כדי לעבור. כדי לשבור את התקע, סובב את צלחת 24 הבאר בזווית של 45 מעלות. הניחו את קצה הפיפטה בקצה התקע ועקרו אותו בעדינות על ידי פיפטינג של כל תקע כשש עד 10 פעמים.
מחזירים את צלחת 24 הקידוחים לאינקובטור סטרילי בטמפרטורה של 37 מעלות עם 5% פחמן דו חמצני, למשך שלוש עד ארבע דקות. לאחר הדגירה, פיפטה את הטריפסין למעלה ולמטה חמש עד שבע פעמים עבור כל באר תחת ארון בטיחות ביולוגי. מעבירים את הקולונואידים המנותקים מכל באר לצינור חרוטי סטרילי של 15 מיליליטר ומעלים עד נפח של 10 מיליליטר עם מדיום שטיפת עכברים קר כקרח.
לאחר מכן, צנטריפוגה את הקולונואידים המעוכלים חלקית ב 300 גרם במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס בצנטריפוגת דלי מתנדנדת. מתחת לארון הבטיחות הביולוגי, מוציאים את הסופרנאטנט מהגלולה באמצעות פיפטה של 10 מיליליטר. כמו כן, הסר את כל המדיום שנותר באמצעות פיפטה P 200.
לאחר מכן, להשעות מחדש את גלולת קולונואיד על ידי הוספת 75 מיקרוליטר של מדיום monolayer murine. יש להוציא 75 מיקרוליטר של תרחיף הקולונואיד למרכז כל תוספת תרבית תאים. מקציפים בעדינות את המתלה פעם או פעמיים לפני הוספתו לבאר כדי להבטיח ציפוי אחיד.
הניחו את צלחת 24 הבארות עם תוספות תרבית התא על פלטפורמה מסתובבת למשך 10 דקות כדי לאפשר פיזור אחיד על פני תוספת תרבית התא, לפני הנחת הצלחת בטמפרטורה סטרילית של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור של 5% פחמן דו חמצני. בסוף הדגירה, עקרו את שברי הקולונואידים הלא מחוברים על ידי הנחת הקצה לצד החלק הפנימי של תרבית התא ופיפטציה של התווך שלוש עד חמש פעמים עם פיפטה P 200. הימנע מהפרעה לתאי המעי המחוברים.
מוציאים מיד את תערובת המדיום והקולונואידים. חזור על הפעולה עד לניקוי כל תוספות תרבית התא. כעת הוסיפו 150 מיקרוליטר של מדיום חד-שכבתי מורין שחומם מראש לצד האפי של כל תוספת תרבית תאים.
הוסף 400 מיקרוליטר של מדיום חד-שכבתי מורין מחומם לכל באר של צלחת חדשה של 24 בארות. מעבירים את תרבית התא לצלחת החדשה על ידי תפיסת השיניים שלה באמצעות מלקחיים סטריליים. החליפו את המדיום כל יומיים עד להשגת המפגש הרצוי.
הקולונואידים המשובשים אנזימטית שצופו על תוספות תרבית התאים הופיעו בתחילה בצבירי תאים בטווח שבין 15 ל-150 תאים. ביום השלישי, התאים השתטחו וכיסו לאט לאט את החדרת תרבית התא, בדרך כלל הגיעו למפגש. במהלך הימים הבאים, חד-שכבות המשיכו לגדול ויצרו מחסום רציף שניתן למדוד כמותית.