Name: Passaging and Scoring the Caenorhabditis elegans P0 Generation for Germline GFP Expression (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-05-05T12:10:00
Duration: 2 min 2 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Passaging and Scoring the Caenorhabditis elegans P0 Generation for Germline GFP Expression at JoVE.com

passaging and scoring the caenorhabditis elegans p0 generation for germline gfp expression

Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in C. elegans Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

Watch this Scientific Journal Video about Passaging and Scoring the Caenorhabditis elegans P0 Generation for Germline GFP Expression at JoVE.com

Passaging and Scoring the Caenorhabditis elegans P0 Generation for Germline GFP Expression (Video) | JoVE 

Passeren en scoren van de Caenorhabditis elegans P0-generatie voor kiembaan-GFP-expressie

Begin met het voorbereiden van de agarosepads door een druppel gesmolten 1% agarose op de vinylplaat te plaatsen met behulp van een glazen Pasteur-pipet. Oriënteer een glasplaatje zo dat de lijnen op de plaat horizontaal of verticaal zijn en plaats het glaasje snel op de agarosedruppel gedurende 30 seconden. Verwijder het glasplaatje van de plaat en voeg ongeveer vijf microliter vers bereide vijfmolaire levamisol toe onder de stereoscoop.Veeg voorzichtig met de buis met wormen en breng 5 tot 10 microliter over op het agarosekussen om de wormen te monteren. Maak een schatting van het aantal wormen terwijl ze worden toegevoegd, zodat er ongeveer 40 wormen per replica zijn. Leg de wormen in rijen op een rij met een wimperprikker en plaats een glazen dekglaasje op het glaasje.Isoleer de embryo's van de resterende wormen met behulp van het bleekprotocol en leg 250 embryo's op 35 millimeter NGM-platen die zijn ingezaaid met OP50-1-bacteriën. Gebruik onder de fluorescerende stereoscoop een GFP-filterset en tel en noteer het aantal GFP-positieve en GFP-negatieve wormen op de objectglaasjes voor elke replicatie met behulp van een teller. De handmatige scoring van het nucleaire GFP-signaal in de kiembaan voor elke generatie toonde aan dat de uitschakeling van het transgen volledig penetrant was in de gescoorde P0- en F1-wormen die werden behandeld met GFP-RNAi.In de F2-generatie was het aandeel van de bevolking dat overerving van GFP-uitschakeling vertoonde ongeveer 50%Tegen de F5-generatie vertoonde de meerderheid van de bevolking niet de overerving van uitschakeling. Tegen de F10-generatie brachten alle wormen GFP tot expressie en werd er geen overerving gedetecteerd.

Research

JoVE Journal

Genetics

Passaging and Scoring the Caenorhabditis elegans P0 Generation for Germline GFP Expression

Epigenetic Inheritance and ChIP in Caenorhabditis elegans

RNAi Inheritance and ChIP in C. elegans (Video) | JoVE

Analyse van transgenerationele epigenetische overerving in C. elegans met behulp van een fluorescerende reporter en chromatine-immunoprecipitatie (ChIP)

Transgenerational epigenetic inheritance (TEI) allows the transmission of information through the germline without changing the genome sequence, through ...

Bleaching and Plating Caenorhabditis elegans P0 Generation Embryos onto RNAi-NGM plates

Bleaching and Plating Caenorhabditis elegans P0 Generation Embryos onto RNAi-NGM plates (Video) | JoVE 

Bleken en plateren van Caenorhabditis elegans P0 Generation Embryo's op RNAi-NGM-platen

Collection of F1 Generation Caenorhabditis elegans for Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

Collection of F1 Generation Caenorhabditis elegans for Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) (Video) | JoVE 

Verzameling van F1-generatie Caenorhabditis elegans voor chromatine-immunoprecipitatie (ChIP)

Formaldehyde Crosslinking of the F1 Generation of Caenorhabditis elegans for ChIP

Formaldehyde Crosslinking of the F1 Generation of Caenorhabditis elegans for ChIP (Video) | JoVE 

Formaldehyde-verknoping van de F1-generatie van Caenorhabditis elegans voor ChIP

Sonication of Formaldehyde-Crosslinked Caenorhabditis elegans and Chromatin Immunoprecipitation

Sonication of Formaldehyde-Crosslinked Caenorhabditis elegans and Chromatin Immunoprecipitation (Video) | JoVE 

Sonicatie van formaldehyde-verknoopte Caenorhabditis elegans en chromatine-immunoprecipitatie