Начните приготовление агарозных подушечек, поместив каплю расплавленной 1%-ной агарозы на виниловую пластинку с помощью стеклянной пастеровской пипетки. Сориентируйте предметное стекло так, чтобы линии на пластинке были горизонтальными или вертикальными, и быстро поместите предметное стекло на агарозную каплю на 30 секунд. Извлеките предметное стекло из пластинки и добавьте примерно пять микролитров свежеприготовленного пятимиллимолярного левамизола под стереоскоп.
Осторожно щелкните пробирку с червями и перенесите 5-10 микролитров на агарозную подушечку, чтобы закрепить червей. Оцените количество червей по мере их добавления таким образом, чтобы на репликацию приходилось примерно 40 червей. Выровняйте червей рядами с помощью насадки для ресниц и положите на предметное стекло покровное стекло.
Изолируйте эмбрионы от оставшихся червей, используя протокол отбеливания, и поместите 250 эмбрионов на 35-миллиметровые планшеты NGM, засеянные бактериями OP50-1. Под флуоресцентным стереоскопом используйте установленный фильтр GFP, подсчитайте и запишите количество GFP-положительных и GFP-отрицательных червей на предметных стеклах для каждой репликации с помощью счетчика счётчика. Ручная оценка ядерного сигнала GFP в зародышевой линии для каждого поколения показала, что сайленсинг трансгена был полностью пенетрантным у червей P0 и F1, обработанных GFP РНК-интерференцией.
В поколении F2 доля популяции, демонстрирующей наследование подавления GFP, составляла примерно 50%К поколению F5 у большинства популяции не наблюдалось наследования молчания. К поколению F10 все черви экспрессировали GFP, и наследование не было обнаружено.