Name: Sonication of Formaldehyde-Crosslinked Caenorhabditis elegans and Chromatin Immunoprecipitation (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-05-05T12:10:00
Duration: 2 min 41 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Sonication of Formaldehyde-Crosslinked Caenorhabditis elegans and Chromatin Immunoprecipitation at JoVE.com

sonication of formaldehyde-crosslinked caenorhabditis elegans and chromatin immunoprecipitation

Analysis of Transgenerational Epigenetic Inheritance in C. elegans Using a Fluorescent Reporter and Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

Watch this Scientific Journal Video about Sonication of Formaldehyde-Crosslinked Caenorhabditis elegans and Chromatin Immunoprecipitation at JoVE.com

Sonication of Formaldehyde-Crosslinked Caenorhabditis elegans and Chromatin Immunoprecipitation (Video) | JoVE 

फॉर्मलाडेहाइड-क्रॉसलिंक्ड केनोरहाब्डिस एलिगेंस और क्रोमैटिन इम्यूनोप्रेसिटेशन का सोनिकेशन

फॉर्मलाडेहाइड क्रॉसलिंक्ड सी एलिगेंस नमूनों के 90 से 120 माइक्रोलीटर को पॉलीस्टीरिन सोनिकेशन ट्यूब में मिलाकर और एलिकोट करके शुरू करें। 2एक्स डिटर्जेंट युक्त रीसस्पेंशन बफर की एक समान मात्रा जोड़ें। सात मिनट के लिए एक पानी स्नान सोनिकेटर में सोनिकेट करें।धीरे से पाइप िंग द्वारा नमूने को मिलाएं और अतिरिक्त सात मिनट के लिए सोनिकेशन दोहराएं। एक बार ऐसा करने के बाद, सोनिकेटेड लाइसेट को 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें। डिटर्जेंट के बिना रीसस्पेंशन बफर की आधी मात्रा जोड़ें।चार डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए 13,000 जी पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, लाइसेट सुपरनैटेंट को चार भागों में विभाजित करें। इनपुट लाइसेट भाग को 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में माइनस 20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। उपयुक्त इम्यूनोप्रेसिपेशन या आईपी नमूने में एंटी-एच 3 के 9 ट्राइमिथाइलेशन, एंटी-हिस्टोन एच 3 या आईजीजी के 0.5 माइक्रोग्राम जोड़ें।रोटेशन के साथ रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर प्रतिक्रिया को इनक्यूबेट करें। अगले दिन, 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में प्रति आईपी नमूने में प्रोटीन जी लेपित चुंबकीय मोतियों के नौ माइक्रोलीटर को एलिकोट करें। एफए -150 के एक मिलीलीटर के साथ दो धोने के बाद, एफए -150 बफर में चुंबकीय मोतियों को फिर से निलंबित करें।एक बार ऐसा करने के बाद, घूर्णन के साथ दो घंटे के लिए ट्यूबों को चार डिग्री सेल्सियस पर इंजेक्ट करने से पहले प्रत्येक आईपी एंटीबॉडी मिश्रण में चुंबकीय मोती निलंबन के 7.5 माइक्रोलीटर जोड़ें। इसके बाद, प्रत्येक बफर समाधान के कम से कम 200 माइक्रोलीटर का उपयोग करके चुंबकीय मोतियों को सात बार धोएं। धोने के लिए चुंबकीय स्टैंड पर मोतियों को इकट्ठा करने से पहले रोटेशन के साथ पांच मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर प्रत्येक वॉश को इनक्यूबेट करें।बफर के अंतिम धोने के बाद, 50 माइक्रोलीटर क्रोमैटिन आईपी क्षालन बफर में चुंबकीय मोतियों को फिर से निलंबित करें, और इसे 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें। थर्मोमिक्सर में नमूने को सलामी देने के बाद, मोतियों को एक चुंबकीय स्टैंड पर इकट्ठा करें और सतह पर तैरनेवाला को एक नई ट्यूब में स्थानांतरित करें। क्रोमैटिन इम्यूनोप्रेसिटेशन क्षालन बफर के एक और 50 माइक्रोलीटर के साथ क्षालन को दोहराएं।एक बार ऐसा करने के बाद, रिवर्स क्रॉस-लिंकिंग और डीएनए एल्यूशन के साथ आगे बढ़ने से पहले कुल 100 माइक्रोलीटर सुपरनैटेंट खींचें।

Research

JoVE Journal

Genetics

Sonication of Formaldehyde-Crosslinked Caenorhabditis elegans and Chromatin Immunoprecipitation

Epigenetic Inheritance and ChIP in Caenorhabditis elegans

RNAi Inheritance and ChIP in C. elegans (Video) | JoVE

एक फ्लोरोसेंट रिपोर्टर और क्रोमैटिन इम्यूनोप्रेसिपेशन (सीएचआईपी) का उपयोग करके सी एलिगेंस में ट्रांसजेनरेशनल एपिजेनेटिक इनहेरिटेंस का विश्लेषण

Transgenerational epigenetic inheritance (TEI) allows the transmission of information through the germline without changing the genome sequence, through ...

Bleaching and Plating Caenorhabditis elegans P0 Generation Embryos onto RNAi-NGM plates

Bleaching and Plating Caenorhabditis elegans P0 Generation Embryos onto RNAi-NGM plates (Video) | JoVE 

आरएनएआई-एनजीएम प्लेटों पर ब्लीचिंग और प्लेटिंग केनोरहाब्डिस एलिगेंस पी 0 पीढ़ी के भ्रूण

Passaging and Scoring the Caenorhabditis elegans P0 Generation for Germline GFP Expression

Passaging and Scoring the Caenorhabditis elegans P0 Generation for Germline GFP Expression (Video) | JoVE 

जर्मलाइन जीएफपी अभिव्यक्ति के लिए केनोरहाब्डिस एलिगेंस पी 0 पीढ़ी को पासिंग और स्कोरिंग

Collection of F1 Generation Caenorhabditis elegans for Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

Collection of F1 Generation Caenorhabditis elegans for Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) (Video) | JoVE 

क्रोमैटिन इम्यूनोप्रेसिटेशन (CHIP) के लिए F1 जनरेशन केनोरहाब्डिस एलिगेंस का संग्रह

Formaldehyde Crosslinking of the F1 Generation of Caenorhabditis elegans for ChIP

Formaldehyde Crosslinking of the F1 Generation of Caenorhabditis elegans for ChIP (Video) | JoVE 

सीएचआईपी के लिए केनोरहाब्डिस एलिगेंस की एफ 1 पीढ़ी का फॉर्मलाडेहाइड क्रॉसलिंकिंग