Uploaded: 2024-01-19T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing Slides of CVS-11 Virus Antigen for Detecting Rabies-Specific Antibodies at JoVE.com

preparing slides of cvs-11 virus antigen for detecting rabies-specific antibodies

Detection of Rabies IgG and IgM Antibodies Using the Rabies Indirect Fluorescent Antibody Test

Watch this Scientific Journal Video about Preparing Slides of CVS-11 Virus Antigen for Detecting Rabies-Specific Antibodies at JoVE.com

Forberedelse af dias af CVS-11-virusantigen til påvisning af rabiesspecifikke antistoffer

Til at begynde med skal du bære personlige værnemidler, herunder øjenbeskyttelse, en kirurgisk maske og ikke-latexhandsker. Forbered 20 ml museneuroblastom eller BHK-21-celler til en koncentration på 3,0 gange 10 til de femte celler pr. Milliliter i EGM. Hold de forberedte celler kolde, indtil de er klar til brug.Forbered derefter CVS-11-viruset ved at fortynde det i EGM. Sørg for at holde den tilberedte virus kold, indtil den bruges. Rengør fugtglidekammeret og polytetrafluorethylenbelagte brøndmikroskopglas med 70% ethanol, og lad dem lufttørre i biosikkerhedsskabet.Efter rengøring tilsættes destilleret vand til strimlerne af absorberende papir i glidekammeret for at sikre konstant fugtighed under hele proceduren. Brug en blyant til at mærke hvert dias med de nødvendige identifikationsoplysninger, f.eks. lotnummer, dato og celletype. Placer de mærkede dias i diaskammeret til opbevaring.Påfør derefter 50 mikroliter virusfortynding på brøndene på mikroskopobjekterne ved hjælp af en gentagende pipette. Påfør 50 mikroliter cellefortynding på hver brønd, vær forsigtig med ikke at forurene pipettespidsen med den virus, der allerede er i brønden. Luk derefter fugtighedsglidekammeret og placer det i den fugtige inkubator mellem 34 og 36 grader Celsius.Fjern derefter objektglasset fra fugtighedskammeret og aspirer supernatanten omhyggeligt. Vask diaset i to minutter i en PBS-fyldt coplin-krukke, og lad det derefter lufttørre. Sæt diaset i en kold acetonefyldt coplin-krukke for at fastgøre prøven.Anbring krukken i en minus 20 grader Celsius fryser, der er godkendt til brændbare materialer, i mindst en time. Når acetonen fordamper og diaset tørrer, skal du anvende rabies direkte fluorescerende antistofkonjugat til diasbrøndene og inkubere diaset i 30 minutter i en 34 til 36 grader Celsius fugtig inkubator. Vask derefter diaset to gange i en coplin-krukke med PBS i to minutter hver.Lufttør glideren og monter dækslet med 0,05 molær triss, 0,15 molær natriumchlorid i 20% glycerolmonteringsmiddel. Brug et fluorescerende mikroskop ved 200 gange forstørrelse til at evaluere celleinfektiviteten. Fjern derefter de resterende dias fra inkubatoren og fugtighedskammeret.Supernatanten suges forsigtigt ud af hvert hul. Placer derefter diasene i en coplin-krukke med PBS i et til to minutter. Lad gliderne lufttørre i ca. 30 minutter, og opbevar dem derefter ved minus 80 grader Celsius indtil brug.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparing Slides of CVS-11 Virus Antigen for Detecting Rabies-Specific Antibodies

Quick and Early Detection of Rabies Antibodies to Evaluate the Immune Response in a Patient

Rabies-Specific Antibody Isotypes Detection in Sera or Cerebral Spinal Fluid Using an IFA Test (Video) | JoVE

Påvisning af rabies IgG- og IgM-antistoffer ved hjælp af rabies indirekte fluorescerende antistoftest

The rabies indirect fluorescent antibody (IFA) test was developed to detect various rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid. ...

Indirect Fluorescent Antibody (IFA) Test to Detect Rabies-Specific Antibody Isotypes in Sera or Cerebral Spinal Fluid

Indirekte fluorescerende antistof (IFA) test til påvisning af rabiesspecifikke antistofisotyper i sera eller cerebral spinalvæske