Uploaded: 2024-01-19T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing Slides of CVS-11 Virus Antigen for Detecting Rabies-Specific Antibodies at JoVE.com

preparing slides of cvs-11 virus antigen for detecting rabies-specific antibodies

Detection of Rabies IgG and IgM Antibodies Using the Rabies Indirect Fluorescent Antibody Test

Watch this Scientific Journal Video about Preparing Slides of CVS-11 Virus Antigen for Detecting Rabies-Specific Antibodies at JoVE.com

Förbereda glas av CVS-11-virusantigen för att upptäcka rabiesspecifika antikroppar

Till att börja med, använd personlig skyddsutrustning, inklusive ögonskydd, en kirurgisk mask och latexfria handskar. Förbered 20 milliliter musneuroblastom eller BHK-21-celler till en koncentration av 3,0 gånger 10 till de femte cellerna per milliliter i EGM. Förvara de förberedda cellerna kallt tills de är redo att användas.Förbered sedan CVS-11-viruset genom att späda ut det i EGM. Se till att hålla det förberedda viruset kallt tills det används. Rengör fuktrutschbanorna och polytetrafluoretenbelagda brunnsglasen med 70 % etanol och låt dem lufttorka i biosäkerhetsskåpet.Efter rengöring, tillsätt destillerat vatten till remsorna av absorberande papper i objektglaskammaren för att säkerställa konstant luftfuktighet under hela proceduren. Använd en penna och märk varje bild med den identifieringsinformation som krävs, till exempel partinummer, datum och celltyp. Placera de märkta objektglasen i objektglaskammaren för förvaring.Applicera sedan 50 mikroliter virusutspädning på brunnarna på objektglasen med hjälp av en upprepande pipett. Applicera 50 mikroliter cellutspädning på varje brunn och var försiktig så att du inte kontaminerar pipettspetsen med viruset som redan finns i brunnen. Stäng sedan fuktrutschkanans kammare och placera den i den fuktiga inkubatorn mellan 34 och 36 grader Celsius.Ta sedan bort objektglaset från fuktkammaren och aspirera noggrant supernatanten. Tvätta objektglaset i två minuter i en PBS-fylld coplinburk och låt det sedan lufttorka. Lägg objektglaset i en kall acetonfylld coplinburk för att fixera provet.Ställ burken i en frys med minus 20 grader som är godkänd för brandfarliga material i minst en timme. När acetonet har avdunstat och objektglaset torkat, applicera rabies direkt fluorescerande antikroppskonjugat på objektglasets brunnar och inkubera objektglaset i 30 minuter i en fuktig inkubator för 34 till 36 grader Celsius. Tvätta sedan objektglaset två gånger i en coplinburk PBS i två minuter vardera.Lufttorka objektglaset och montera täckglaset med 0,05 molar triss, 0,15 molar natriumklorid i 20% glycerolfäste. Använd ett fluorescerande mikroskop vid 200 gångers förstoring för att utvärdera cellens smittsamhet. Ta sedan bort de återstående objektglasen från inkubatorn och fuktkammaren.Aspirera supernatanten från varje brunn försiktigt. Lägg sedan objektglasen i en coplinburk med PBS i en till två minuter. Låt objektglasen lufttorka i cirka 30 minuter och förvara dem sedan i minus 80 grader Celsius tills de används.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparing Slides of CVS-11 Virus Antigen for Detecting Rabies-Specific Antibodies

Quick and Early Detection of Rabies Antibodies to Evaluate the Immune Response in a Patient

Rabies-Specific Antibody Isotypes Detection in Sera or Cerebral Spinal Fluid Using an IFA Test (Video) | JoVE

Påvisande av rabies-, IgG- och IgM-antikroppar med hjälp av det indirekta fluorescerande rabiesantikroppstestet

The rabies indirect fluorescent antibody (IFA) test was developed to detect various rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid. ...

Indirect Fluorescent Antibody (IFA) Test to Detect Rabies-Specific Antibody Isotypes in Sera or Cerebral Spinal Fluid

Indirekt fluorescerande antikroppstest (IFA) för att påvisa rabiesspecifika antikroppsisotyper i sera eller cerebral ryggmärgsvätska