Uploaded: 2024-01-19T12:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Indirect Fluorescent Antibody IFA Test to Detect Rabies-Specific Antibody Isotypes in Sera or Cerebral Spinal Fluid at JoVE.com

indirect fluorescent antibody (ifa) test to detect rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid

Detection of Rabies IgG and IgM Antibodies Using the Rabies Indirect Fluorescent Antibody Test

Watch this Scientific Journal Video about Indirect Fluorescent Antibody IFA Test to Detect Rabies-Specific Antibody Isotypes in Sera or Cerebral Spinal Fluid at JoVE.com

अप्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी (IFA) परीक्षण सीरा या सेरेब्रल स्पाइनल फ्लूइड में रेबीज-विशिष्ट एंटीबॉडी आइसोटाइप का पता लगाने के लिए

शुरू करने के लिए, परीक्षण के लिए रोगी के सीरम या सेरेब्रल स्पाइनल द्रव के नमूनों को कमजोर पड़ने की तैयारी करें। 0.05% इवांस ब्लू के साथ पीबीएस में पतला करके उचित काम एकाग्रता पर आवश्यक संयुग्म तैयार करें। अप्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी परीक्षणों के लिए, परख के लिए आवश्यक तैयार एंटीजन स्लाइड की उचित संख्या को पुनः प्राप्त करें।स्लाइड्स को डीफ़्रॉस्ट करने और पूरी तरह से सूखने दें। इसके बाद, स्लाइड्स को एसीटोन से भरे कॉपलिन जार में रखें और उन्हें ज्वलनशील पदार्थों के लिए अनुमोदित माइनस 20 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर में दो घंटे से रात भर के लिए स्थानांतरित करें। बाद में, एसीटोन से स्लाइड हटा दें और उन्हें हवा में सूखने दें।अब, जैव सुरक्षा कैबिनेट के अंदर आर्द्रता कक्ष बॉक्स में स्लाइड रखें। आर्द्रता बनाए रखने के लिए, आसुत जल लथपथ शोषक स्ट्रिप्स को कक्ष में जोड़ें। प्रत्येक नियंत्रण नमूने, नमूना कमजोर पड़ने या पीबीएस के 50 माइक्रोलीटर को पूर्व निर्धारित अच्छी तरह से लागू करें।30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस, 5% कार्बन डाइऑक्साइड आर्द्रता इनक्यूबेटर पर बंद आर्द्रता स्लाइड कक्ष रखें। एक बार हो जाने के बाद, इनक्यूबेटर से आर्द्रता स्लाइड कक्ष को हटा दें और इसे जैव सुरक्षा कैबिनेट में स्थानांतरित करें। एक एस्पिरेटर टिप का प्रयोग, ध्यान से सेल monolayer परेशान बिना प्रत्येक अच्छी तरह से सतह पर तैरनेवाला महाप्राण महाप्राण.बाद में, एक बाँझ ड्रॉपर विंदुक का उपयोग कर प्रत्येक अच्छी तरह से करने के लिए पीबीएस की एक बूंद लागू. ध्यान से पीबीएस महाप्राण और पीबीएस से भरा एक कोपलिन जार में प्रत्येक स्लाइड हस्तांतरण. अगला स्लाइड्स को वापस आर्द्रता कक्ष बॉक्स में रखें।उपयुक्त एंटी-ह्यूमन एंटीबॉडी के 50 माइक्रोलीटर को प्रत्येक कुएं पर लगाएं और आर्द्र इनक्यूबेटर में 30 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन के अंत में, आर्द्रता कक्ष को जैव सुरक्षा कैबिनेट में स्थानांतरित करें। एक एस्पिरेटर टिप का उपयोग सतह पर तैरनेवाला महाप्राण.बाद में, एक बाँझ ड्रॉपर विंदुक का उपयोग कर प्रत्येक अच्छी तरह से करने के लिए पीबीएस की एक बूंद लागू. पीबीएस को हटाने के बाद, कुल 15 मिनट के लिए पीबीएस के कोपलिन जार में स्लाइड को दो बार धो लें। एक बार धोया, स्लाइड हवा सूखी करने के लिए अनुमति देते हैं, तो बढ़ते मीडिया के साथ एक कवर पर्ची माउंट.स्लाइड ले लो और फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी के तहत उन्हें पढ़ें. कोई प्रतिदीप्ति और चार प्लस नमूने दिखा नकारात्मक नमूने के साथ नकारात्मक से चार प्लस से नमूने ग्रेड, एक उज्ज्वल हरे रंग की प्रतिदीप्ति दिखा. कमजोर पड़ने वाले कारक द्वारा दर्शाए गए नमूने और समापन बिंदु मान असाइन करें जिस पर नमूना एक से दो प्लस ग्रेड प्रदर्शित करता है।प्रारंभिक टीकाकरण के बाद, रोगी के नमूनों में इम्युनोग्लोबुलिन एम और जी दोनों के उच्च स्तर देखे गए। टीकाकरण के लगभग छह महीने बाद, रोगी के नमूनों में दोनों एंटीबॉडी के काफी कम स्तर मौजूद थे, लेकिन इम्युनोग्लोबुलिन एम का स्तर लगभग पूरी तरह से गिर गया था। टीकाकरण के 18 महीने बाद, रोगी के नमूनों में इम्युनोग्लोबुलिन एम एंटीबॉडी का पता नहीं चला।इम्युनोग्लोबुलिन जी का स्तर बना रहा और दो सप्ताह के समय बिंदु से प्रारंभिक कमी के बाद छह महीने के समय बिंदु पर पाया गया।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Indirect Fluorescent Antibody (IFA) Test to Detect Rabies-Specific Antibody Isotypes in Sera or Cerebral Spinal Fluid

Quick and Early Detection of Rabies Antibodies to Evaluate the Immune Response in a Patient

Rabies-Specific Antibody Isotypes Detection in Sera or Cerebral Spinal Fluid Using an IFA Test (Video) | JoVE

रेबीज का उपयोग करके रेबीज आईजीजी और आईजीएम एंटीबॉडी का पता लगाना अप्रत्यक्ष फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी परीक्षण

The rabies indirect fluorescent antibody (IFA) test was developed to detect various rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid. ...

Preparing Slides of CVS-11 Virus Antigen for Detecting Rabies-Specific Antibodies

रेबीज-विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए सीवीएस -11 वायरस एंटीजन की स्लाइड तैयार करना