اجمع ما يقرب من 10 مرات 10 إلى الخلايا المتغصنة المشتقة من الخلية الأحادية البشرية السادسة المتمايزة عن الخلايا الوحيدة. من 10 آبار من صفيحة البئر ال 24 التي تحتوي على 1.3 مرة 10 إلى الخلايا السادسة لكل بئر ، قم بنقلها إلى أنبوب مخروطي معقم جديد سعة 15 ملليلتر. بعد طرد الخلايا عند 300 جرام لمدة خمس إلى سبع دقائق في درجة حرارة الغرفة ، باستخدام الاستراحة العادية ، تخلص من المادة الطافية لإزالة الخلايا الميتة والحطام.
أضف 10 ملليلتر من وسط RPMI 1640 الذي يحتوي على 11.1 ملليمولار جلوكوز إلى الأنبوب. بعد الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة لمدة أربع دقائق عند 300 جرام ، باستخدام الاستراحة العادية ، تخلص من المادة الطافية مرة أخرى. أضف ملليلتر من وسيط RPMI 1640 إلى حبيبات الخلية وقسم ملليلتر واحد من تعليق الخلية إلى أنبوبين صغيرين معقمين جديدين يسميان بالرقم واحد ورقم اثنين.
إلى الأنبوب الصغير الأول ، أضف 500 وحدة ملي من سياليداز من كلوستريديوم بيرفرينجنز. احتضان كلا الأنبوبين لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية. بعد الحضانة ، انقل الخلايا من كلا الأنبوبين الصغيرين إلى أنابيب مخروطية جديدة مقابلة سعة 15 ملليلتر تحمل الرقم واحد ورقم اثنين.
ثم أضف ما يقرب من أربعة ملليلتر من وسيط RPMI 1640 الكامل الذي يحتوي على 10٪ FBS لكل أنبوب مخروطي. أجهزة الطرد المركزي الأنابيب في درجة حرارة الغرفة لمدة أربع دقائق عند 300 جرام باستخدام الاستراحة العادية وإضافة خمسة ملليلتر من وسيط RPMI 1640 الكامل إلى الحبيبات. لوحة خلايا ملليلتر واحد لكل بئر.
تم تقييم فعالية علاج Sailidase لتقليل محتوى حمض السياليك أسفل سطح الخلايا المتغصنة المشتقة من الخلايا الوحيدات البشرية عن طريق قياس التدفق الخلوي والفحص المجهري متحد البؤر. قلل علاج Sailidase بشكل ملحوظ من ارتباط Maackia Amurensis lectin و Sambucus nigra lectin مع زيادة تلطيخ ليكتين الفول السوداني. أظهر الانخفاض في تلطيخ Sambucus nigra lectin بعد علاج Sailidase انخفاضا كبيرا في تلطيخ Sambucus nigra lectin على سطح الخلية.