Recolecta aproximadamente 10 veces 10 a la sexta células dendríticas derivadas de monocitos humanos diferenciadas de los monocitos. De los 10 pocillos de la placa de 24 pocillos que tienen 1,3 veces 10 a la sexta celda por pocillo, transfiéralos a un nuevo tubo cónico estéril de 15 mililitros. Después de centrifugar las células a 300 g durante cinco a siete minutos a temperatura ambiente, utilizando el descanso normal, deseche el sobrenadante para eliminar las células muertas y los desechos.
Agregue 10 mililitros de medio RPMI 1640 que contiene 11,1 milimolares de glucosa al tubo. Después de centrifugar a temperatura ambiente durante cuatro minutos a 300 G, utilizando el descanso normal, deseche el sobrenadante nuevamente. Agregue dos mililitros de medio RPMI 1640 al gránulo de la celda y divida un mililitro de la suspensión celular en dos nuevos microtubos estériles etiquetados como número uno y número dos.
Al microtubo uno, agregue 500 miliunidades de Sialidasa de Clostridium perfringens. Incubar ambos tubos durante 60 minutos a 37 grados centígrados. Después de la incubación, transfiera las células de ambos microtubos a los nuevos tubos cónicos de 15 mililitros correspondientes etiquetados como número uno y número dos.
A continuación, añada aproximadamente cuatro mililitros de medio RPMI 1640 completo que contenga un 10% de FBS a cada tubo cónico. Centrifugar los tubos a temperatura ambiente durante cuatro minutos a 300 g utilizando el descanso normal y añadir cinco mililitros de medio RPMI 1640 completo al pellet. Coloque una placa de un mililitro de células por pocillo.
La eficacia del tratamiento con Sailidase para reducir el contenido de ácido siálico en la superficie de las células dendríticas derivadas de monocitos humanos se evaluó mediante citometría de flujo y microscopía confocal. El tratamiento con sailidasa disminuyó significativamente la unión de la lectina de Maackia Amurensis y la lectina de Sambucus nigra, al tiempo que aumentó la tinción de lectina de aglutinina de cacahuete. La disminución de la tinción de lectina de Sambucus nigra después del tratamiento con Sailidase mostró una reducción significativa de la tinción de lectina de Sambucus nigra en la superficie de la célula.