Treatment of the Monocyte-Derived Dendritic Cells (Mo-DCs) with Sialidase

Samla in cirka 10 gånger 10 till den sjätte humana monocyten härledda dendritiska celler differentierade från monocyterna. Från de 10 brunnarna på plattan med 24 brunnar med 1,3 gånger 10 till de sjätte cellerna per brunn, överför dem till ett nytt sterilt 15 ml koniskt rör. Efter centrifugering av cellerna vid 300 G i fem till sju minuter vid rumstemperatur, med normal paus, kassera supernatanten för att avlägsna döda celler och skräp.

Tillsätt 10 ml RPMI 1640 medium som innehåller 11,1 millimolär glukos till röret. Efter centrifugering i rumstemperatur i fyra minuter vid 300 G, med normal paus, kassera supernatanten igen. Tillsätt två milliliter RPMI 1640-medium till cellpelleten och dela upp en milliliter av cellsuspensionen i två nya sterila mikrorör märkta som nummer ett och nummer två.

Tillsätt 500 millienheter Sialidase från Clostridium perfringens till mikrorör ett. Inkubera båda rören i 60 minuter vid 37 grader Celsius. Efter inkubation, överför cellerna från båda mikrorören till motsvarande nya 15 milliliter koniska rör märkta som nummer ett och nummer två.

Tillsätt sedan cirka fyra milliliter komplett RPMI 1640-medium som innehåller 10%FBS till varje koniskt rör. Centrifugera rören vid rumstemperatur i fyra minuter vid 300 G med den normala pausen och tillsätt fem milliliter komplett RPMI 1640-medium till pelleten. Plätera en milliliter celler per brunn.

Effekten av behandling med Sailidase för att minska sialinsyrahalten på ytan av humana monocythärledda dendritiska celler utvärderades med flödescytometri och konfokalmikroskopi. Sailidasbehandling minskade signifikant bindningen av Maackia Amurensis lektin och Sambucus nigra lektin samtidigt som jordnötsagglutininfärgningen ökade. Minskningen av Sambucus nigra lectin färgning efter behandling med Sailidase visade en signifikant minskad Sambucus nigra lectin färgning på cellens yta.