Monositlerden farklılaşmış altıncı insan monosit türevli dendritik hücrelerin yaklaşık 10 katını 10 kez toplayın. Kuyu başına 1.3 kez 10 ila altıncı hücrelere sahip 24 oyuklu plakanın 10 kuyusundan, bunları yeni bir steril 15 mililitrelik konik tüpe aktarın. Hücreleri oda sıcaklığında beş ila yedi dakika boyunca 300G'de santrifüjledikten sonra, normal arayı kullanarak, ölü hücreleri ve kalıntıları çıkarmak için süpernatanı atın.
Tüpe 11.1 milimolar glikoz içeren 10 mililitre RPMI 1640 ortamı ekleyin. Oda sıcaklığında 300G'de dört dakika santrifüjledikten sonra, normal arayı kullanarak süpernatanı tekrar atın. Hücre peletine iki mililitre RPMI 1640 ortamı ekleyin ve hücre süspansiyonunun bir mililitresini bir numara ve iki numara olarak etiketlenmiş iki yeni steril mikro tüpe bölün.
Mikro tüpe Clostridium perfringens'ten 500 mili birim Sialidase ekleyin. Her iki tüpü de 37 santigrat derecede 60 dakika inkübe edin. İnkübasyondan sonra, hücreleri her iki mikro tüpten bir numara ve iki numara olarak etiketlenmiş yeni 15 mililitrelik konik tüplere aktarın.
Daha sonra her bir konik tüpe %10 FBS içeren yaklaşık dört mililitre tam RPMI 1640 ortamı ekleyin. Normal mola kullanarak tüpleri oda sıcaklığında 300G'de dört dakika santrifüjleyin ve pelete beş mililitre tam RPMI 1640 ortamı ekleyin. Kuyucuk başına bir mililitre hücre plakası.
İnsan monosit türevli dendritik hücrelerin yüzeyindeki sialik asit içeriğini azaltmak için Sailidaz tedavisinin etkinliği, akış sitometrisi ve konfokal mikroskopi ile değerlendirildi. Sailidaz tedavisi, Maackia Amurensis lektin ve Sambucus nigra lektin bağlanmasını önemli ölçüde azaltırken, Fıstık aglütininin lektin boyamasını artırdı. Sailidaz tedavisinden sonra Sambucus nigra lektin boyamasındaki azalma, hücre yüzeyinde önemli ölçüde azalmış bir Sambucus nigra lektin boyaması gösterdi.