Maturation Profiling of Human Monocyte-Derived Dendritic Cells (Mo-DCs)

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October 20th, 2023

DOI :

10.3791/200352-v

October 20th, 2023

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Vanessa C. C. Luz^1,2, Zélia Silva^1,2, Patrícia Sobral^1,2,3, Ankit Tanwar^4,5, Rachel L. Paterson⁶, Paula A. Videira^1,2,7

¹Associate Laboratory i4HB - Institute for Health and Bioeconomy, NOVA School of Science and Technology, Universidade NOVA de Lisboa, ²UCIBIO - Applied Molecular Biosciences Unit, Department of Life Sciences, NOVA School of Science and Technology, Universidade NOVA de Lisboa, ³LAQV and REQUIMTE, Departamento de Química, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade NOVA de Lisboa, ⁴Department of Microbiology and Immunology, Albert Einstein College of Medicine, ⁵Department of Oncology, Albert Einstein College of Medicine, ⁶Stemmatters, Biotecnologia e Medicina Regenerativa SA, Parque de Ciência e Tecnologia Avepark, Zona Industrial da Gandra, ⁷CDG & Allies - Professionals and Patient Associations International Network (CDG & Allies - PPAIN), Department of Life Sciences, NOVA School of Science and Technology, Universidade NOVA de Lisboa

Transcript

सामान्य ब्रेक के साथ 300 ग्राम पर पांच मिनट के लिए कमरे के तापमान पर कोशिकाओं को धोकर एंटीबॉडी धुंधला करने के लिए रुचि की कोशिकाओं का एक नया नमूना एकत्र करना शुरू करें। कोशिकाओं को सूक्ष्म ट्यूबों में वितरित करें। वांछित एंटीबॉडी का उपयोग करके धुंधला करने के लिए, कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए अंधेरे में प्रतिदीप्ति संयुग्मित एंटीबॉडी को इनक्यूबेट करें।

कमरे के तापमान पर 300 ग्राम पर पांच मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजिंग से पहले कोशिकाओं को एक मिलीलीटर पीबीएस से धोएं। सभी सूक्ष्म ट्यूबों में पीबीएस के 100 माइक्रोलीटर तक जोड़ें। फिर 2% पैराफॉर्मलडिहाइड के 300 माइक्रोलीटर में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें, और ट्यूबों को प्रवाह साइटोमेट्री तक चार डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे में स्टोर करें।

एंटीजन प्रस्तुत करने वाले अणुओं एमएचसी-1 और एमएचसी-2 की अभिव्यक्ति और सियालिडेज़ उपचार के कारण सीडी 80 और सीडी 86 सह-उत्तेजक अणुओं की अभिव्यक्ति में एक महत्वपूर्ण वृद्धि देखी गई।

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