Name: Staining of Sub-Retinal Pigment Epithelium (RPE) Deposits (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-07-28T12:50:00
Duration: 2 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Staining of Sub-Retinal Pigment Epithelium RPE Deposits at JoVE.com

staining of sub-retinal pigment epithelium (rpe) deposits

LipidUNet-Machine Learning-Based Method of Characterization and Quantification of Lipid Deposits Using iPSC-Derived Retinal Pigment Epithelium

Watch this Scientific Journal Video about Staining of Sub-Retinal Pigment Epithelium RPE Deposits at JoVE.com

Staining of Sub-Retinal Pigment Epithelium (RPE) Deposits (Video) | JoVE 

Окрашивание отложений субретинального пигментного эпителия (РПЭ)

Для начала растворите порошок Nile Red в ацетоне в концентрации три миллиграмма на миллилитр. Выдерживают раствор в течение 15 минут при комнатной температуре с периодическим перемешиванием. Отфильтруйте раствор с помощью 0,22-микрометрового фильтра один или два раза в зависимости от количества осадка, оставшегося в растворе.Затем готовят рабочий раствор, разбавляя исходный раствор в соотношении один к 500 в DPBS. Добавляют 200 мкл рабочего раствора к параформальдегид-фиксированным клеткам РПЭ и инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре на шейкере, защищающем от света. После инкубации образцы дважды промывают DPBS, затем добавляют 200 микролитров DPBS и хранят их при температуре четыре градуса Цельсия.Для окрашивания БОДИПИ приготовьте 3,8-миллимолярную концентрацию, растворив БОДИПИ в безводном ДМСО. Затем готовят рабочий раствор, разбавляя исходный раствор в соотношении один к 300 в DPBS. Добавляют 200 мкл рабочего раствора БОДИПЫ к параформальдегид-фиксированным клеткам РПЭ и инкубируют в течение ночи на коромысле при комнатной температуре.На следующий день дважды промойте клетки DPBS и добавьте 200 микролитров DPBS перед хранением при температуре четыре градуса по Цельсию. Для иммуноокрашивания APOE приготовьте буферный раствор, комбинируя DPBS с 1%BSA, 0,5%Tween 20 и 0,5%Triton X-100. Блокируйте и пермеабилизируйте фиксированные параформальдегидом клетки RPE в 200 микролитрах буферного раствора в течение одного часа.После инкубации добавьте первичные антитела APPLE, разведенные в соотношении один к 100 в буферном растворе, и инкубируйте в течение ночи при комнатной температуре. На следующий день промойте образцы дважды с помощью DPBS. Затем добавьте 200 микролитров раствора вторичных антител, разведенного в соотношении один к 1000, в течение одного часа при комнатной температуре.После инкубации промойте клетки дважды DPBS и добавьте 200 микролитров DPBS перед хранением при температуре четыре градуса Цельсия.

Research

JoVE Journal

Biology

Staining of Sub-Retinal Pigment Epithelium (RPE) Deposits

Modeling and Analyzing Retinal Degeneration

Unraveling the Pathogenesis of Age-Related Macular Degeneration and Discovering Potential Therapies (Video) | JoVE

LipidUNet-Метод характеристики и количественной оценки липидных отложений с использованием пигментного эпителия сетчатки, полученного из iPSC

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of hexagonal cells located at the back of the eye. It provides nourishment and support to ...

Image Processing of REP Deposits, Segmentation, and Quantification

Image Processing of REP Deposits, Segmentation, and Quantification (Video) | JoVE 

Обработка изображений отложений REP, сегментация и количественная оценка