Uploaded: 2023-08-04T13:20:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation at JoVE.com

murine embryonal hypothalamus extraction, collection, and tissue dissociation

Isolation of Targeted Hypothalamic Neurons for Studies of Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation

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小鼠胚胎下丘脑提取、采集和组织解离

首先使用本生燃烧器对三个牧场移液器进行火抛光，以减小直径。接下来，用70%乙醇对安乐死的怀孕小鼠母亲的腹部进行消毒。切开从耻骨合成到肋骨剑突的腹腔。现在，从腹腔中提取子宫角并将其放入装有冰冷HBSS溶液的100毫米平板中。使用细镊子从洗涤的子宫中提取并分离所有胚胎。快速斩首提取的小鼠胚胎，并将头部放入装有HBSS的60毫米培养皿中。在眼腔中放置一对细镊子以容纳大脑。用另一对，剥皮皮肤和头骨，直到大脑可见。从头骨的嗅球中挖出大脑并将其倒置。观察腹侧的皮层和背侧的下丘脑。使用弯曲的镊子去除脑膜和血管层，直到大脑看起来白色和清晰，并将下丘脑区域与大脑的其余部分分开。将下丘脑切成三到四小块细块，然后用移液管将这些碎片转移到15毫升的管中。接下来，用六毫升HBSS填充试管。然后在组织沉淀并去除上清液后加入酶混合物 1。将试管在 37 摄氏度的水浴中孵育 15 分钟，每五分钟搅拌一次以重新悬浮组织。现在，加入 30 微升酶混合物 2，并通过用大直径牧场移液管上下移液 10 次来解离组织。再孵育 10 分钟后，加入剩余的 15 微升酶混合物 2。利用两个直径减小的火抛光移液器，将组织移液10次。立即向管中加入10毫升含有0.5%BSA的HBSS。然后在室温下以300G离心管10分钟。吸出上清液并将细胞沉淀重新悬浮在含有0.5%BSA的一毫升HBSS中。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation

Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation of Isolated Hypothalamic Neurons

Hypothalamic Neural Mechanism Insights (Video) | JoVE

分离靶向下丘脑神经元，用于激素、代谢和电调节研究

The hypothalamus regulates fundamental metabolic processes by controlling functions as varied as food intake, body temperature, and hormone release. As ...

科研

神经科学

Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures

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