Uploaded: 2023-08-04T13:20:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation at JoVE.com

murine embryonal hypothalamus extraction, collection, and tissue dissociation

Isolation of Targeted Hypothalamic Neurons for Studies of Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation

Watch this Scientific Journal Video about Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation at JoVE.com

Murine embryonale hypothalamus extractie, verzameling en weefseldissociatie

Begin met het brandpolijsten van drie weidepipetten met behulp van een bunsenbrander, waardoor de diameters afnemen. Steriliseer vervolgens de buik van een geëuthanaseerde zwangere muizenmoeder met 70% ethanol. Snijd de buikholte open van de schaamstreeksynthese tot het xiphoid-proces van de ribbenkast.Haal nu de baarmoederhoorn uit de buikholte en plaats deze in een plaat van 100 millimeter gevuld met ijskoude HBSS-oplossing. Extraheer en scheid alle embryo's van de gewassen baarmoeder met behulp van een fijne tang. Onthoofd snel de geëxtraheerde muizenembryo's en plaats de koppen in een petrischaal van 60 millimeter gevuld met HBSS.Plaats een fijne tang in de oogholte om de hersenen vast te houden. Met een ander paar, schil de huid en schedel totdat de hersenen zichtbaar zijn. Schep de hersenen uit de reukbollen uit de schedel en draai deze ondersteboven.Observeer de cortex aan de ventrale kant en de hypothalamus aan de dorsale kant. Gebruik een gebogen tang om de laag hersenvliezen en bloedvaten te verwijderen totdat de hersenen wit en helder lijken en scheid het hypothalamusgebied van de rest van de hersenen. Snijd de hypothalamus in drie tot vier kleine fijne stukjes en gebruik een pipet om de stukjes over te brengen in een buis van 15 milliliter.Vul vervolgens de tube met zes milliliter HBSS. Voeg vervolgens Enzym Mix 1 toe zodra het weefsel is bezinkt en het supernatant is verwijderd. Incubeer de buis gedurende 15 minuten in een waterbad van 37 graden Celsius en roer elke vijf minuten om het weefsel opnieuw te suspenseren.Voeg nu 30 microliter Enzym Mix 2 toe en dissocieer het weefsel door 10 keer op en neer te pipetteren met een weidepipet met een grote diameter. Voeg na een extra incubatie van 10 minuten de resterende 15 microliter Enzym Mix 2 toe. Met behulp van twee vuur gepolijste pipetten met een afnemende diameter, pipetteer het weefsel 10 keer.Voeg onmiddellijk 10 milliliter HBSS met 0,5% BSA toe aan de buis. Centrifugeer vervolgens de buis op 300 G gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Zuig het supernatant op en suspensie de celpellet opnieuw in een milliliter HBSS met 0,5% BSA.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation

Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation of Isolated Hypothalamic Neurons

Hypothalamic Neural Mechanism Insights (Video) | JoVE

Isolatie van gerichte hypothalamus neuronen voor studies van hormonale, metabole en elektrische regulatie

The hypothalamus regulates fundamental metabolic processes by controlling functions as varied as food intake, body temperature, and hormone release. As ...

Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures

Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE 

Magnetische scheiding en negatieve selectie van murine neuronale culturen

Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures

Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE 

Magnetische scheiding en positieve selectie van murine neuronale culturen