Uploaded: 2023-08-04T13:20:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation at JoVE.com

murine embryonal hypothalamus extraction, collection, and tissue dissociation

Isolation of Targeted Hypothalamic Neurons for Studies of Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation

Watch this Scientific Journal Video about Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation at JoVE.com

Экстракция, сбор и диссоциация тканей эмбрионального гипоталамуса мышей

Начните с огневой полировки трех пастбищных пипеток с помощью горелки Бунзена, создавая уменьшающийся диаметр. Затем простерилизуйте брюшную полость усыпленной беременной мышиной матери 70%-ным этанолом. Разрезают брюшную полость от лобкового синтеза до мечевидного отростка грудной клетки.Теперь извлеките рог матки из брюшной полости и поместите ее в 100-миллиметровую пластину, наполненную ледяным раствором HBSS. Извлеките и отделите все эмбрионы от промытой матки с помощью тонких щипцов. Быстро обезглавьте извлеченные эмбрионы мышей и поместите головы в 60-миллиметровую чашку Петри, наполненную HBSS.Поместите пару тонких щипцов в глазную полость, чтобы удерживать мозг. Другой парой снимите кожу и череп до тех пор, пока мозг не станет виден. Выньте мозг из обонятельных луковиц черепа и переверните его вверх ногами.Наблюдайте за корой головного мозга на вентральной стороне и гипоталамусом на дорсальной стороне. Используйте изогнутые щипцы, чтобы удалить слой мозговых оболочек и кровеносных сосудов до тех пор, пока мозг не станет белым и чистым, и отделите область гипоталамуса от остальной части мозга. Разрежьте гипоталамус на три-четыре небольших мелких кусочка и с помощью пипетки переложите кусочки в 15-миллилитровую пробирку.Далее наполните тюбик шестью миллилитрами HBSS. Затем добавьте Enzyme Mix 1 после того, как ткань успокоится и надосадочная жидкость будет удалена. Инкубируйте пробирку на водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия в течение 15 минут, перемешивая каждые пять минут, чтобы снова суспендировать ткань.Теперь добавьте 30 микролитров Enzyme Mix 2 и диссоциируйте ткань, пипетируя вверх и вниз 10 раз с помощью пастбищной пипетки большого диаметра. После дополнительной 10-минутной инкубации добавьте оставшиеся 15 микролитров Enzyme Mix 2. Используя две отполированные до блеска пипетки уменьшающегося диаметра, протрите ткань 10 раз.Сразу же добавьте в пробирку 10 миллилитров HBSS с 0,5% БСА. Затем центрифугируют пробирку при 300 G в течение 10 минут при комнатной температуре. Аспирируйте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клеточную гранулу в одном миллилитре HBSS с 0,5% BSA.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation

Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation of Isolated Hypothalamic Neurons

Hypothalamic Neural Mechanism Insights (Video) | JoVE

Выделение таргетных нейронов гипоталамуса для исследований гормональной, метаболической и электрической регуляции

The hypothalamus regulates fundamental metabolic processes by controlling functions as varied as food intake, body temperature, and hormone release. As ...

Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures

Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE 

Магнитная сепарация и отрицательный отбор культур мышиных нейронов

Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures

Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE 

Магнитная сепарация и положительный отбор культур нейронов мышей