Uploaded: 2023-08-04T13:20:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation at JoVE.com

murine embryonal hypothalamus extraction, collection, and tissue dissociation

Isolation of Targeted Hypothalamic Neurons for Studies of Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation

Watch this Scientific Journal Video about Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation at JoVE.com

Extraktion, insamling och dissociation av musembryonal hypotalamus i musmusen

Börja med att eldpolera tre betespipetter med hjälp av en bunsenbrännare, vilket skapar minskande diametrar. Sterilisera sedan buken på en avlivad dräktig mushona med 70 % etanol. Skär upp bukhålan från blygdbenssyntesen till xiphoid-processen i bröstkorgen.Dra nu ut livmoderhornet från bukhålan och placera det i en 100 millimeters platta fylld med iskall HBSS-lösning. Extrahera och separera alla embryon från den tvättade livmodern med en fin pincett. Halshugg snabbt de extraherade musembryona och placera huvudena i en 60-millimeters petriskål fylld med HBSS.Placera en fin pincett i ögonhålan för att hålla hjärnan. Med ett annat par, skala huden och skallen tills hjärnan är synlig. Skopa ut hjärnan ur luktbulberna från skallen och vänd den upp och ner.Observera cortex på den ventrala sidan och hypotalamus på den dorsala sidan. Använd en böjd pincett för att ta bort lagret av hjärnhinnor och blodkärl tills hjärnan ser vit och klar ut, och separera hypotalamusområdet från resten av hjärnan. Skär hypotalamus i tre till fyra små fina bitar och använd en pipett för att överföra bitarna till ett 15-milliliters rör.Fyll sedan röret med sex milliliter HBSS. Tillsätt sedan Enzyme Mix 1 när vävnaden har satt sig och supernatanten har avlägsnats. Inkubera röret i ett vattenbad med 37 grader Celsius i 15 minuter, omrörs var femte minut för att återsuspendera vävnaden.Tillsätt nu 30 mikroliter Enzyme Mix 2 och dissociera vävnaden genom att pipettera upp och ner 10 gånger med en betespipett med stor diameter. Efter ytterligare 10 minuters inkubation, tillsätt de återstående 15 mikroliter Enzyme Mix 2. Använd två eldpolerade pipetter med minskande diameter och pipettera vävnaden 10 gånger.Tillsätt omedelbart 10 milliliter HBSS med 0,5 % BSA i röret. Centrifugera sedan röret vid 300 G i 10 minuter i rumstemperatur. Aspirera supernatanten och suspendera cellpelleten i en milliliter HBSS med 0,5 % BSA.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Murine Embryonal Hypothalamus Extraction, Collection, and Tissue Dissociation

Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation of Isolated Hypothalamic Neurons

Hypothalamic Neural Mechanism Insights (Video) | JoVE

Isolering av riktade hypotalamusneuroner för studier av hormonell, metabolisk och elektrisk reglering

The hypothalamus regulates fundamental metabolic processes by controlling functions as varied as food intake, body temperature, and hormone release. As ...

Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures

Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE 

Magnetisk separation och negativ selektion av murina neuronala kulturer

Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures

Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE 

Magnetisk separation och positivt urval av musneuronala kulturer