Name: Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-08-04T13:20:00
Duration: 2 min 43 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures at JoVE.com

magnetic separation and negative selection of murine neuronal cultures

Isolation of Targeted Hypothalamic Neurons for Studies of Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation

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Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE 

चुंबकीय पृथक्करण और म्यूरिन न्यूरोनल संस्कृतियों का नकारात्मक चयन

आठ मिनट के लिए 300 जी पर पृथक मस्तिष्क कोशिका निलंबन को सेंट्रीफ्यूज करके शुरू करें। 0.5% बीएसए समाधान के साथ एचबीएसएस के 80 माइक्रोलीटर में गोली को फिर से निलंबित करें। गैर न्यूरोनल सेल बायोटिन एंटीबॉडी कॉकटेल के 20 माइक्रोलीटर जोड़ें और इनक्यूबेट करें।0.5% बीएसए के साथ दो मिलीलीटर एचबीएसएस के साथ कोशिकाओं को धोएं। फिर 0.5% बीएसए के साथ एचबीएसएस के 80 माइक्रोलीटर में सेंट्रीफ्यूज गोली को फिर से निलंबित करें। अब अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए 20 माइक्रोलीटर एंटी बायोटिन माइक्रोबीड्स, और पिपेट जोड़ें।ठंडा होने के बाद इनक्यूबेशन 0.5 मिलीलीटर एचबीएसएस बीएसए घोल जोड़ें। 0.5% बीएसए के साथ 0.5 मिलीलीटर एचबीएसएस के साथ कॉलम को धोने से पहले स्टैंड सेट करें। इसके बाद कॉलम के नीचे एक 15 मिलीलीटर ट्यूब रखें और इसके माध्यम से सेल निलंबन के 0.5 मिलीलीटर पास करें।अवशिष्ट न्यूरोनल कोशिकाओं को पकड़ने के लिए 0.5% बीएसए समाधान के साथ 0.5 मिलीलीटर एचबीएसएस के साथ तीन वॉश करें। चुंबक से स्तंभ निकालें और इसे एक नई 15 मिलीलीटर ट्यूब के अंदर रखें। 0.5% बीएसए के साथ एचबीएसएस का एक मिलीलीटर जोड़ें और चुंबकीय रूप से लेबल किए गए गैर न्यूरोनल कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए प्लंजर का उपयोग करें।सेल सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, 0.5% बीएसए समाधान के साथ एचबीएसएस के एक मिलीलीटर में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें। एक ब्राइटफील्ड माइक्रोस्कोप के तहत एक न्यूबॉयर काउंटिंग चैंबर पर कोशिकाओं की गणना करें। एलईपीआर पॉजिटिव न्यूरॉन्स ने 48 घंटों के बाद न्यूरॉइट्स बनाना शुरू कर दिया।DIV4 अक्षीय एक्सटेंशन में प्रगति दिखाई दी जबकि डेंड्राइटिक प्रक्रियाएं दिखाई देने लगीं। DIV6 में न्यूरॉन्स पर्याप्त रूप से विकसित हुए थे। इम्यूनोफ्लोरोसेंट अध्ययनों से पता चला है कि कोई ग्लियल कोशिकाएं या अन्य गैर न्यूरोनल कोशिकाएं नहीं देखी गईं।कोशिकाओं की न्यूरोनल प्रकृति की पुष्टि सूक्ष्मनलिका से जुड़े प्रोटीन दो धुंधला पन द्वारा की गई थी। DIV10 में 30% LEPR पॉजिटिव कोशिकाओं ने POMC व्यक्त किया। विषम हाइपोथैलेमिक न्यूरोनल आबादी वाले सामान्य संस्कृतियों में सिनैप्टिक कनेक्टिविटी और कार्यक्षमता देखी गई।

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JoVE Journal

Neuroscience

Magnetic Separation and Negative Selection of Murine Neuronal Cultures

Hormonal, Metabolic, and Electrical Regulation of Isolated Hypothalamic Neurons

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हार्मोनल, चयापचय और विद्युत विनियमन के अध्ययन के लिए लक्षित हाइपोथैलेमिक न्यूरॉन्स का अलगाव

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मुराइन भ्रूण हाइपोथैलेमस निष्कर्षण, संग्रह, और ऊतक पृथक्करण

Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures

Magnetic Separation and Positive Selection of Murine Neuronal Cultures (Video) | JoVE 

चुंबकीय पृथक्करण और मुराइन न्यूरोनल संस्कृतियों का सकारात्मक चयन