Name: Preparation of Bacterial Inoculum for Acinetobacter Biofilm Formation (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-08-04T14:10:00
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preparation of bacterial inoculum for acinetobacter biofilm formation

Quantification, Viability Assessment, and Visualization Strategies for Acinetobacter Biofilms

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Preparation of Bacterial Inoculum for Acinetobacter Biofilm Formation (Video) | JoVE 

Preparação de Inóculo Bacteriano para Formação de Biofilme de Acinetobacter

Para iniciar o processo de preparação do inóculo bacteriano, colete de 2 a 10 microlitros da cepa bacteriana do frasco, usando uma ponta de pipeta estéril, e inocular uma placa de ágar sangue comercialmente disponível com ela. Usando um laço estéril, risque a superfície do ágar, afinando-a com chamas intermitentes. Incubar a placa de ágar preparada numa posição invertida a 30 graus Celsius durante cerca de 20 a 24 horas.Em seguida, selecionar uma única colônia da cultura bacteriana com uma agulha estéril e inocular cinco mililitros de caldo BHI estéril com essa cultura. Incubar o caldo inoculado em uma incubadora a 30 graus Celsius a uma velocidade de 150 rotações por minuto por cerca de 20 a 24 horas. Em seguida, transferir um mililitro da cultura para um tubo de microcentrífuga estéril e centrifugar a 6.000 g e temperatura ambiente por 10 minutos.Após a centrifugação, descarte o sobrenadante. Adicione um mililitro de solução salina estéril tamponada com fosfato, ou PBS, ao pellet e suspenda-o novamente usando um vórtice. Centrifugar o pellet ressuspenso a 6 000 g durante 10 minutos à temperatura ambiente e eliminar o sobrenadante.Desta vez, ressuspenda o pellet resultante em caldo BHI estéril e dez vezes diluído usando vórtice. Certifique-se de atingir uma densidade óptica de cerca de 0,1 a 600 nanômetros.

Research

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Biology

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