Name: Isolation of Stromal Vascular Fraction (SVF) from Perivascular Adipose Tissue (PVAT) (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-07-21T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Stromal Vascular Fraction SVF from Perivascular Adipose Tissue PVAT at JoVE.com

isolation of stromal vascular fraction (svf) from perivascular adipose tissue (pvat)

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Stromal Vascular Fraction-derived Preadipocytes from Mouse Periaortic Adipose Tissue

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Stromal Vascular Fraction SVF from Perivascular Adipose Tissue PVAT at JoVE.com

Isolation of Stromal Vascular Fraction (SVF) from Perivascular Adipose Tissue (PVAT) (Video) | JoVE 

Выделение стромально-васкулярной фракции (SVF) из периваскулярной жировой ткани (PVAT)

Работая под ламинарным колпаком второго класса, начните с последовательной промывки периваскулярной жировой ткани или PVAT, взятых у мышей два раза. Во-первых, использование PBS, содержащего 10% пенициллина-стрептомицина, и, во-вторых, использование PBS, дополненного 1%-ным пенициллин-стрептомицином. Переложите промытые ткани в стерильную 60-миллиметровую чашку Петри и добавьте в нее 200 микролитров раствора для пищеварения.С помощью стерильных ножниц измельчите салфетки на кусочки, имеющие размер в один кубический миллиметр. С помощью стерильных ножниц отрежьте пластиковый наконечник пипетки, чтобы расширить его конец. Затем переложите измельченную смесь для салфеток в центрифужную пробирку объемом 15 миллилитров с помощью наконечника пипетки с широким концом.Добавьте шесть миллилитров раствора для пищеварения в ткани, чтобы инициировать пищеварение. Привязав пробирку горизонтально к решетке, инкубируйте ее при температуре 37 градусов Цельсия в орбитальном шейкере в течение 30-45 минут. Каждые 5-10 минут вынимайте трубку из шейкера в инкубаторе и вручную энергично встряхивайте ее вверх и вниз.Пропустите переваренную тканевую смесь через ситечко для клеток размером 70 микрон в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров. Промойте ситечко равным объемом питательной среды, чтобы максимизировать выход клеток и утолить пищеварение. Перелейте фильтрат в новую 15-миллилитровую центрифужную пробирку.Центрифугируйте пробирку, чтобы выделить стромально-васкулярную фракцию или SVF. Переверните пробирку, чтобы удалить надосадочную жидкость и повторно суспендировать гранулу в пяти миллилитрах PBS. Снова центрифугируйте пробирку при концентрации 1,800 G в течение пяти минут, прежде чем выбросить надосадочную жидкость.Повторно суспендируйте гранулу в соответствующем объеме питательной среды. Поместите клетки в покрытую коллагеном 12-луночную пластину и инкубируйте в течение ночи при температуре 37 градусов Цельсия во влажной атмосфере с 5% углекислого газа. На следующий день удалите клеточный мусор и эритроциты путем аспирации питательной среды и промывания клеток предварительно подогретым до 37 градусов Цельсия PBS с добавлением антибиотиков.Наконец, добавьте по одному миллилитру свежей питательной среды в каждую лунку и продолжайте культивирование клеток, пока они не достигнут желаемой стадии слияния.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Stromal Vascular Fraction (SVF) from Perivascular Adipose Tissue (PVAT)

Culturing Preadipocytes Isolated from Murine Perivascular Adipose Tissue

The Significance of Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of SVF-Derived Preadipocytes from Mouse Perivascular Adipose Tissue (Video) | JoVE

Выделение, культивирование и адипогенная индукция преадипоцитов, полученных из стромально-васкулярной фракции, из периаортальной жировой ткани мыши

Perivascular adipose tissue (PVAT) is an adipose tissue depot that surrounds blood vessels and exhibits the phenotypes of white, beige, and brown ...

Dissection and Isolation of Murine Perivascular Adipose Tissue (PVAT)

Рассечение и изоляция периваскулярной жировой ткани мышей (PVAT)