アルコール不溶性残渣からの糖鎖抽出

まず、機械式TissueLyserを使用して、事前に調製したAIR CDTA混合物を27ヘルツで2分間振とうし、続いて10ヘルツで2時間振とうします。次に、混合物を10, 000 Gで4°Cで10分間遠心分離します。上清を滅菌マイクロ遠心チューブに移します。

最後に、水酸化ナトリウムと水素化ホウ素ナトリウムの混合物を残留ペレットに加えます。ペレットを振とうして遠心分離した後、残留ペレットを蒸留水で2〜3回洗浄します。セルラーゼ1ミリグラムあたり30マイクロリットルをペレットに加え、酵素の最適温度でヒートブロック内でチューブを16時間インキュベートします。

サンプルを遠心分離し、上清をロータリーシェーカーに保存します。保存したすべての抽出物を、10, 000 G で 4 °C で 10 分間再度遠心分離します。