포토튜너블 하이드로겔 구조물의 3D 프린팅을 시작하려면 프린트 헤드 내에 섬유아세포가 포함된 하이드로겔 바이오 잉크가 있는 유리 주사기를 놓고 프린팅을 위한 단단한 조립을 보장하면서 프린트 헤드 구성 요소를 부착합니다. 그런 다음 Pronterface 소프트웨어의 방향 화살표를 사용하여 웰 플레이트의 웰 중앙에 있는 지지 수조 슬러리 내에서 압출 바늘의 위치를 수동으로 조심스럽게 조정합니다. 바늘 끝 아래에 최소 1mm의 슬러리를 남겨 두십시오.
바늘 끝이 올바르게 배치되면 Pronterface 소프트웨어의 인쇄 버튼을 누르고 인쇄가 완료될 때까지 기다립니다. 원하는 수의 바이오프린팅된 작제물이 얻어질 때까지 이전에 시연된 단계를 반복합니다. 인쇄 후, 생물 안전 캐비닛의 실온에서 구조물을 덮은 웰 플레이트를 1시간 동안 그대로 두십시오.
이를 통해 광조정 가능한 하이드로겔 바이오 잉크로 염기 촉매 중합이 발생할 수 있습니다. 그런 다음 3D 바이오프린팅 구조물이 있는 웰 플레이트를 섭씨 37도의 멸균 인큐베이터에 12-18시간 동안 넣어 지지 수조 슬러리를 녹입니다. 다음으로, 생물 안전 캐비닛 내부에서 바이오프린팅된 구조물을 둘러싼 매체를 교체합니다.
이렇게하려면 구조물을 방해하지 않고 우물에서 매체와 녹은 젤라틴 지지 수조를 수동으로 제거하십시오. 그런 다음 각 웰에 적절한 양의 저혈청 배지를 추가합니다. 다시 말하지만, 원하는 경화 시점 24시간 전에 웰의 배지를 2.2m몰 멸균 LAP가 보충된 저혈청 배지로 교체합니다.
원하는 경화 시점에 경화할 웰에서 매체의 절반을 제거하고 OmniCure의 자외선 또는 자외선 아래에 뚜껑이 없는 플레이트를 놓습니다. 365나노미터 대역 통과 필터로 UV 조명을 켜서 5분 동안 구조물을 강화합니다. 굳어지면 각 웰에 새로운 저혈청 배지를 추가하기 전에 이 웰에서 남아 있는 배지를 제거합니다.
원하는 시점에서 섬유아세포 활성화 연구를 수행할 때까지 플레이트를 인큐베이터로 되돌려 산성 바이오 잉크와 염기성 지지 수조 슬러리의 조합은 3D 바이오프린팅 구조물의 중합을 촉진하고 원통형 구조를 유지했습니다. 형광 표지된 하이드로겔의 현미경 검사는 지지 수조의 젤라틴 미세 입자에 의해 유도된 하이드로겔 내의 기공을 보여주었습니다. 컨포칼 현미경은 3D에서 공간 제어 과경화를 보여주었습니다.
섬유아세포 생존도 분석은 벽 두께가 300미크론이고 밀리리터당 400만 개의 세포를 갖는 구조물이 모든 시점에서 다른 모든 조건을 능가한다는 것을 보여주었습니다. 생존율은 7일째에 최고조에 달하여 세포의 약 91%가 살아 염색되었고, 14일째에는 85%가 여전히 생존 가능했습니다.
