Übertragen Sie die gereinigten Gitter mit der gefensterten Folienseite nach oben auf das nasse Löschpapier. Tauchen Sie die hydrophoben Gitter senkrecht in das Wasser, um ein Verbiegen durch Wasserspannung zu verhindern. Ordnen Sie die untergetauchten Gitter in einer quadratischen Anordnung an, wobei sie nahe beieinander liegen, sich aber nicht überlappen.
Füllen Sie die Gitterbeschichtungswanne mit mehr deionisiertem Wasser und stellen Sie sicher, dass die Wasseroberfläche mindestens fünf Millimeter über den Gittern liegt. Um die MMA-Graphenfolie aus der Schale zu schöpfen, senken Sie das Deckglas langsam schräg in die Schale, in einiger Entfernung von der Graphenfolie. Positionieren Sie das Deckglas unter der Graphen-MMA-Folie und richten Sie die Kanten parallel zur Folie aus.
Heben Sie dann das Deckglas senkrecht aus dem Wasser und nehmen Sie die MMA-Graphenfolie mit. Übertragen Sie die MMA-Graphenfolie in die Mulde, indem Sie das Deckglas in einem 45-Grad-Winkel ins Wasser senken, so dass sich die Folie vom Deckglas löst und auf der Wasseroberfläche schwimmt. Positionieren Sie die MMA-Graphenfolie über den Gittern, bevor der Wasserspiegel sinkt.
Verwenden Sie eine Pasteurpipette, deren Spitze geschmolzen wurde, und manipulieren Sie vorsichtig die Position des MMA-Graphenfilms. Senken Sie mit einer Spritze den Wasserspiegel langsam ab, so dass die MMA-Graphenfolie perfekt auf den Gittern landet und deren Oberflächen vollständig bedeckt. Hebe mit einer sauberen, trockenen Pinzette das Löschpapier, mit dem die Gitter befestigt sind, in eine saubere, staubfreie Petrischale.
Platzieren Sie die Basis des Blocks des TEM-Gitterhalters auf dem Boden der ersten Kristallisationsschale, die 200 Milliliter frisches Aceton enthält. Übertragen Sie jedes Gitter einzeln mit der MMA-Seite nach oben vom Löschpapier in eine Vertiefung im Gitterhalterblock. Decken Sie die Schale mit Folie ab und schütteln Sie sie vorsichtig 30 Minuten lang auf einem Orbitalschüttler.
Befestigen Sie die Gitter, indem Sie den Metalldeckel auf den Gitterhalterblock legen. Heben Sie dann mit einer gebogenen Gabel oder einer langen Pinzette den Block vorsichtig aus der Schale und legen Sie ihn auf den Boden der zweiten Schale mit 200 Millilitern frischem Aceton. Nachdem Sie den Deckel vom Block entfernt haben, schütteln Sie ihn vorsichtig 30 Minuten lang auf einem Orbitalschüttler.
Setzen Sie den Deckel wieder auf den Gitterhalterblock und geben Sie ihn in die Schale mit 200 Millilitern Isopropylalkohol. Nehmen Sie den Deckel ab, bevor Sie ihn 20 Minuten lang vorsichtig schütteln. Die Gitter in eine kleine Petrischale aus Glas geben, die mit Löschpapier bedeckt ist, und die Gitter 10 Minuten lang an der Luft trocknen lassen.
In TEM-Beugungsmodi zeigen EM-Gitter, die mit einer Monoschicht aus Graphen bedeckt sind, Bragg-Peaks, die dem hexagonalen Gitter des Graphens entsprechen. Graphengitter haben eine konzentrierende Wirkung auf eine Probe, wie beim Vergleich von Apoferritin beobachtet wird, das auf Gitter aus heiligem Gold mit und ohne Graphenträger aufgetragen wird. Eine schnelle Fourier-Transformation der KryoEM-Aufnahme von Apoferritin auf graphenbedeckten Goldgittern zeigte ebenfalls Bragg-Peaks, die dem hexagonalen Graphengitter entsprechen.