Uploaded: 2023-07-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Thawing Human iPSC-Derived mDA Neurons for Seeding at JoVE.com

thawing human ipsc-derived mda neurons for seeding

Phenotypic Profiling of Human Stem Cell-Derived Midbrain Dopaminergic Neurons

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Auftauen von humanen iPSC-abgeleiteten mDA-Neuronen für die Aussaat

Um die Neuronen am Tag der Aussaat aufzutauen, wird das Wasserbad auf 37 Grad Celsius vorgewärmt. Bringen Sie außerdem das gesamte Pflegemedium auf Raumtemperatur und schützen Sie es gleichzeitig vor Licht. In der Zwischenzeit wird das Fläschchen mit den im Handel erhältlichen gefrorenen Neuronen aus dem Flüssigstickstofftank entnommen und auf Trockeneis umgefüllt.Stellen Sie das Fläschchen dann für zwei Minuten in das Wasserbad bei 37 Grad Celsius, um ein vollständiges Auftauen zu gewährleisten. Desinfizieren Sie anschließend die Durchstechflasche mit 70%igem Ethanol. Mit einer P1000-Pipette werden die etwa 370 Mikroliter aufgetauten Neuronen aus dem Fläschchen in ein 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen übertragen.Spülen Sie die leere Durchstechflasche mit 630 Mikrolitern vollständigem Erhaltungsmedium. Geben Sie das Medium mit einer Pipette in einem 45-Grad-Winkel tropfenweise in das 50-Milliliter-Röhrchen. Auf ähnliche Weise geben Sie mit einer P1000-Pipette einen Milliliter des vollständigen Erhaltungsmediums in das 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen.Geben Sie dann langsam weitere zwei Milliliter vollständiges Pflegemedium in das Röhrchen. Als nächstes werden 10 Mikroliter Trypanblau mit 10 Mikrolitern der Zellsuspension in einem Mikroröhrchen gemischt. Geben Sie dann 10 Mikroliter der Mischung auf einen Zählkammer-Objektträger zum Zählen von Zellen.Nach der Zellzählung und dem Transfer der Neuronen in ein 15-Milliliter-Röhrchen zentrifugieren Sie bei 400 g fünf Minuten lang bei Raumtemperatur. Entfernen Sie anschließend den Überstand. Verwenden Sie eine P1000-Pipette, um das Neuronenpellet vorsichtig in einem Milliliter vollständigem Erhaltungsmedium zu resuspendieren.Zum Schluss fügen Sie das erforderliche Volumen des Mediums hinzu, um die gewünschte Konzentration für die Aussaat der Neuronen am selben Tag zu erreichen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Thawing Human iPSC-Derived mDA Neurons for Seeding

Culturing Human Midbrain Dopaminergic Neurons for Phenotypic Profiling

Generating Neuronal Phenotypic Profiles - A Protocol to Culture and Image Human Midbrain Dopaminergic Neurons (Video) | JoVE

Phänotypisches Profiling von aus menschlichen Stammzellen gewonnenen dopaminergen Neuronen im Mittelhirn

Parkinson&#39;s disease (PD) is linked to a range of cell biological processes that cause midbrain dopaminergic (mDA) neuron loss. Many current in vitro ...

Forschung

Neurowissenschaften

Human iPSC-Derived mDA Neurons Seeding and Compound Treatment for Phenotypic Profiling

Human iPSC-Derived mDA Neurons Seeding and Compound Treatment for Phenotypic Profiling (Video) | JoVE 

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Bildverarbeitung von fluoreszenzgefärbten humanen iPSC-abgeleiteten mDA-Neuronen zur Erstellung phänotypischer Profile