Name: Using a Respiratory Chamber to Measure Metabolic Rate in Drosophila melanogaster (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-07-07T13:20:00
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using a respiratory chamber to measure metabolic rate in drosophila melanogaster

Measuring O2 Consumption in Drosophila melanogaster Using Coulometric Microrespirometry

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Using a Respiratory Chamber to Measure Metabolic Rate in Drosophila melanogaster (Video) | JoVE 

ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में चयापचय दर को मापने के लिए एक श्वसन कक्ष का उपयोग करना

मानक ड्रोसोफिला भोजन से भरे संकीर्ण शीशियों में, 25 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर मक्खियों को बनाए रखने से शुरू करें। पानी के स्नान को चालू करें और आवश्यकतानुसार तापमान समायोजित करें। कक्षों और सेंसर प्लग के जमीन कांच जोड़ों को साफ करने के लिए 70% इथेनॉल के साथ छिड़काव एक प्रयोगशाला पोंछ का उपयोग करें, और फिर किसी भी शेष इथेनॉल को हटाने के लिए एक ताजा पोंछ का उपयोग करें।अगला, एक स्थिर, आर्द्रता वातावरण बनाने के लिए कक्ष के तल पर, शुद्ध पानी में लथपथ, एक कपास रोल का एक सेंटीमीटर टुकड़ा रखें। कॉटन रोल के आधार पर एक मामूली पूल बनाने के लिए पर्याप्त पानी डालें। सुनिश्चित करें कि किसी भी गिरा हुआ पानी पोंछकर कक्ष का जोड़ सूखा है।ध्यान से एक फ़नल का उपयोग लेबल polypropylene ट्यूबों में मक्खियों हस्तांतरण, और एक कपास रोल के साथ ट्यूबों प्लग. अब, प्रत्येक श्वपिरोमीटर कक्ष में मक्खियों युक्त एक हवादार ट्यूब जोड़ें. सोडा लाइम कारतूस भरें और उन्हें ट्यूब के शीर्ष पर रखें जिसमें कक्ष के अंदर मक्खियाँ हों।फिर ऑक्सीजन जनरेटर को कॉपर सल्फेट के संतृप्त समाधान से भरें, यह सुनिश्चित करते हुए कि स्तर वेंट छेद से नीचे रहता है। भरे हुए ऑक्सीजन जनरेटर को सेंसर प्लग पर स्थित दो-पिन कनेक्टर से कनेक्ट करें। सेंसर प्लग के ग्राउंड ग्लास संयुक्त के विपरीत किनारों पर स्पष्ट सिलिकॉन ग्रीस के दो छोटे थपके रखें।प्लग को कक्ष में डालें और संयुक्त के भीतर ग्रीस को समान रूप से वितरित करने के लिए इसे मध्यम दबाव के साथ धीरे से घुमाएं। प्रयोगशाला पोंछे का उपयोग करके किसी भी अतिरिक्त तेल को मिटा दें। फिर प्लास्टिक केक क्लैंप पर तड़क द्वारा कक्ष प्लग को सुरक्षित करें।इकट्ठे कक्षों को पानी के स्नान में एक रैक में रखें, यह सुनिश्चित करें कि स्टॉपकॉक खुले हैं। खुली स्थिति में पानी की टोंटी बनाए रखने और कक्षों लगभग के लिए संतुलित 30 मिनट. सुनिश्चित करें कि ऑक्सीजन जनरेटर को करंट की आपूर्ति करने वाले स्विच बंद हैं।छह कंडक्टर केबल्स का उपयोग करके नियंत्रकों को रेस्पिरोमीटर कक्षों से कनेक्ट करें, और सत्यापित करें कि नियंत्रकों पर कार्बनिक प्रकाश उत्सर्जक डायोड प्रदर्शित होता है जो सक्रिय रूप से पर्यावरणीय मापदंडों को प्रदर्शित करता है। अब नियंत्रक पर स्विच का उपयोग करके ऑक्सीजन जनरेटर को सक्रिय करें। एक बार वर्तमान मूल्य 35 और 55 मिलीमीटर के बीच शून्य से बढ़ जाता है, नियंत्रक और कक्ष प्रयोगों के लिए तैयार हैं.ऑक्सीजन जनरेटर बंद करने के बाद, उन संचार बंदरगाहों की पहचान करें जिनका उपयोग नियंत्रक कर रहे हैं। डेस्क डेस्कटॉप पर PuTTY सॉफ़्टवेयर खोलें और सीरियल लाइन बॉक्स में उस पोर्ट की संख्या दर्ज करके नियंत्रक के लिए संचार पोर्ट का चयन करके रेस्पिरोमीटर के प्रत्येक चैनल के लिए एक लॉग फ़ाइल सेट करें। फिर लॉगिंग पर क्लिक करें।सत्र लॉगिंग में प्रिंसिपल आउटपुट चुनें और लॉग फ़ाइल नाम के अंतर्गत, ब्राउज़ करें क्लिक करें. चुने हुए फ़ोल्डर में, एक फ़ाइल नाम बनाएं जिसमें वर्णनात्मक जानकारी हो। फिर सेव पर क्लिक करें।ओपन पर क्लिक करें, और लॉग इन किए जा रहे सामान्य सीमांकित डेटा को दिखाने वाली एक विंडो खुल जाएगी। उपयोग किए जा रहे अन्य सभी नियंत्रकों के लिए इस प्रक्रिया को दोहराएं। प्रत्येक संचार पोर्ट इनपुट एक अलग विंडो में प्रदर्शित किया जाएगा।30 मिनट के लिए कक्षों को संतुलित करने के बाद, स्टॉपकॉक को बंद करके उन्हें सील करें। एक स्थिर वातावरण बनाने और एक घंटे के लिए संतुलित करने के लिए पॉलीस्टायर्न फोम बॉक्स के साथ स्नान और कक्षों को कवर करें। नियंत्रक बॉक्स पर स्थित स्विच का उपयोग करके प्रत्येक कक्ष के ऑक्सीजन जनरेटर में करंट आरंभ करें।एक बार ऑक्सीजन जनरेटर सक्रिय हो जाने के बाद, सत्यापित करें कि दबाव पूर्वनिर्धारित बंद दबाव तक बढ़ जाता है। प्रयोग के बाद, सभी नियंत्रकों पर ऑक्सीजन जनरेटर बंद करें और कक्षों को खोलने के लिए पानी की टोंटी खोलें. PuTTY खिड़कियों को अंतिम आधार रेखा स्थापित करने के लिए पांच से 15 मिनट के लिए खुला रहने की अनुमति दें, और फिर प्रत्येक नियंत्रक के लिए PuTTY विंडो को बंद करके रिकॉर्डिंग समाप्त करें।सेंसर को केबलों से डिस्कनेक्ट करें और कक्षों को सूखे रैक में ले जाएं। एक-एक करके, कक्षों से सेंसर प्लग को हटा दें। ऑक्सीजन जनरेटर को डिस्कनेक्ट करें और ध्यान से उन्हें ट्यूब रैक में रखें।फिर सेंसर प्लग से ग्रीस को पोंछ लें और इसे वापस रैक में रख दें। कक्ष जोड़ों से किसी भी तेल को साफ करें और मक्खियों और सोडा चूने वाली ट्यूबों को हटा दें। अंत में प्रत्येक ट्यूब के लिए वजन और मक्खियों की संख्या लॉग करें।जंगली प्रकार और पीपा डेल्टा 18 उत्परिवर्ती मक्खियों के लिए मात्रात्मक ऑक्सीजन खपत डेटा से पता चला है कि बड़े पैमाने पर विशिष्ट ऑक्सीजन की खपत जंगली प्रकार के नियंत्रण और पीपा डेल्टा 18 म्यूटेंट के बीच काफी अलग नहीं थी। प्रति मक्खी के आधार पर विश्लेषण की गई ऑक्सीजन खपत से पता चला है कि जंगली प्रकार के नियंत्रणों की तुलना में पीपा डेल्टा 18 में ऑक्सीजन की खपत काफी कम हो गई थी। हालांकि, पीपा डेल्टा 18 मक्खियों का औसत द्रव्यमान जंगली प्रकार के नियंत्रणों की तुलना में कम था।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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