Inizia mantenendo le mosche a una temperatura di 25 gradi Celsius, in fiale strette riempite con cibo standard a base di drosofila. Accendere il bagnomaria e regolare la temperatura secondo necessità. Utilizzare una salvietta da laboratorio spruzzata con etanolo al 70% per pulire i giunti in vetro smerigliato delle camere e dei tappi del sensore, quindi utilizzare una salvietta nuova per rimuovere eventuali residui di etanolo.
Quindi, posiziona un pezzo di un centimetro di un rotolo di cotone, imbevuto di acqua purificata, sul fondo della camera per creare un ambiente stabile e umido. Aggiungere acqua a sufficienza per formare una modesta pozza alla base del rotolo di cotone. Assicurarsi che il giunto della camera sia asciutto asciugando l'acqua versata.
Trasferisci con cura le mosche in tubi di polipropilene etichettati utilizzando un imbuto e tappa i tubi con un rotolo di cotone. Ora, aggiungi un tubo ventilato contenente mosche in ogni camera del respirometro. Riempi le cartucce di calce sodata e posizionale nella parte superiore del tubo che contiene le mosche all'interno della camera.
Quindi riempire i generatori di ossigeno con una soluzione satura di solfato di rame, assicurandosi che il livello rimanga al di sotto dei fori di sfiato. Collegare il generatore di ossigeno pieno al connettore a due pin situato sulla spina del sensore. Posizionare due piccoli tocchi di grasso siliconico trasparente sui lati opposti del giunto in vetro smerigliato della spina del sensore.
Inserire il tappo nella camera e ruotarlo delicatamente con una pressione moderata per distribuire uniformemente il grasso all'interno del giunto. Rimuovere il grasso in eccesso con un panno da laboratorio. Quindi fissare i tappi della camera facendo scattare i morsetti di plastica.
Posizionare le camere assemblate in una griglia nel bagnomaria, assicurandosi che i rubinetti siano aperti. Mantenere i rubinetti in posizione aperta e lasciare che le camere si equilibrino per circa 30 minuti. Assicurarsi che gli interruttori che forniscono corrente ai generatori di ossigeno siano spenti.
Collegare i controller alle camere del respirometro utilizzando i cavi a sei conduttori e verificare che i display del diodo organico a emissione di luce sui controller visualizzino attivamente i parametri ambientali. Ora attiva i generatori di ossigeno utilizzando l'interruttore sul controller. Una volta che il valore di corrente sale da zero a un valore compreso tra 35 e 55 milliampere, il controller e la camera sono pronti per gli esperimenti.
Dopo aver spento i generatori di ossigeno, identificare le porte di comunicazione utilizzate dai controller. Aprire il software PuTTY sul desktop della scrivania e impostare un file di registro per ciascun canale del respirometro selezionando la porta di comunicazione per il controller inserendo il numero di tale porta nella casella della linea seriale. Quindi fare clic su registrazione.
Scegliere l'output principale nella registrazione della sessione e, sotto il nome del file di registro, fare clic su Sfoglia. Nella cartella scelta, creare un nome file contenente informazioni descrittive. Quindi fai clic su Salva.
Fare clic su Apri per aprire e si aprirà una finestra che mostra i dati delimitati comuni registrati. Ripetere questa procedura per tutti gli altri controller in uso. Ogni ingresso della porta di comunicazione verrà visualizzato in una finestra separata.
Dopo aver equilibrato le camere per 30 minuti, sigillarle chiudendo i rubinetti. Coprire il bagno e le camere con una scatola di polistirolo espanso per creare un ambiente stabile e in equilibrio per un'ora. Avviare la corrente al generatore di ossigeno di ciascuna camera utilizzando l'interruttore situato sulla scatola del controller.
Una volta attivati i generatori di ossigeno, verificare che la pressione aumenti fino alla pressione di spegnimento predefinita. Dopo l'esperimento, spegnere i generatori di ossigeno su tutti i controller e aprire i rubinetti per aprire le camere. Lasciare aperte le finestre PuTTY per un periodo compreso tra cinque e 15 minuti per stabilire una linea di base finale, quindi terminare le registrazioni chiudendo la finestra PuTTY per ciascun controller.
Scollegare i sensori dai cavi e trasportare le camere nella griglia a secco. Uno per uno, rimuovere i tappi dei sensori dalle camere. Scollegare i generatori di ossigeno e riporli con cautela nel rack per provette.
Quindi rimuovere il grasso dalla spina del sensore e riposizionarlo nel rack. Pulire il grasso dai giunti della camera e rimuovere i tubi contenenti mosche e calce sodata. Infine registra il peso e il numero di mosche per ogni tubo.
I dati quantitativi sul consumo di ossigeno per i moscerini mutanti delta 18 wild type e cask hanno mostrato che il consumo di ossigeno specifico per la massa non era significativamente diverso tra i controlli wild type e i mutanti delta 18 cask. Il consumo di ossigeno analizzato per mosca ha mostrato che il consumo di ossigeno è stato significativamente ridotto nel delta 18 della botte rispetto ai controlli di tipo selvatico. Tuttavia, la massa media delle mosche delta 18 in botte era inferiore a quella dei controlli wild type.
