For å begynne å forberede elektronmikroskopigitterene for cellulær kryotomografi, plasser rutenettet, lastet med perforert karbonstøttefilm i en glødeutladningsanordning med karbonsiden av rutenettet vendt oppover. Deretter lyser du ut rutenettet ved 15 milliampere, under 0,39 millibar atmosfærisk trykk i 45 sekunder. Når du er ferdig, plasser rutenettet i en ren beholder, foret med filterpapir.
Deretter overfører rutenettet sammen med fibronektin, fosfatbufret saltvann eller PBS, plater og pinsett til et biosikkerhetsskap. Ved hjelp av en mikropipette, støp to sjenerøst store prikker av storfefibronektin på en steril overflate som et seks brønnplatelokk. Forsikre deg om at prikkene er store nok til å omslutte hele rutenettet.
Deretter får du fem til 15 pinsett og behandler begge sider av rutenettet med fibronektinadherensløsningen. Når det er behandlet med bovint fibronektin, blir rutenettet klebrig. Berør forsiktig den ikke-karbon overflaten av rutenettet til bunnen av en tom brønn i en seks brønnplate og slipp pinsetten for å feste rutenettet til den nye overflaten.
Deretter inkuberer rutenettet i 30 minutter i fibronektinadherensløsningen. For å forhindre at ristene tørker, tilsett en til to dråper adherensløsning på toppen av ristene, ved hjelp av en mikropipette hvert 15. minutt. Etter inkubasjonen, fjern overflødig adherensoppløsning med en mikropipette.
Vask ristene ved å legge dråper PBS direkte på toppen av ristene, ved hjelp av mikropipetten to til tre ganger. Steriliser ristene under UV-lys i et biosikkerhetsskap i en time. Plasser ristene så nær UV som mulig for maksimal sterilisering.
Forhindre at ristene tørker under sterilisering ved mikropipettering av en til to dråper PBS på toppen av risten hvert 10. minutt.
