Elektron mikroskobu ızgaralarını hücresel kriyotomografi için hazırlamaya başlamak için, delikli karbon destek filmi yüklü ızgarayı, ızgaranın karbon tarafı yukarı bakacak şekilde bir kızdırma deşarj cihazına yerleştirin. Ardından, ızgarayı 15 miliamperde, 0.39 milibar atmosfer basıncı altında 45 saniye boyunca kızdırma deşarjı. Bittiğinde, ızgarayı filtre kağıdı ile kaplı temiz bir kaba koyun.
Ardından, ızgarayı fibronektin, fosfat tamponlu salin veya PBS, plakalar ve cımbızla birlikte bir biyogüvenlik kabinine aktarın. Bir mikro pipet kullanarak, altı kuyulu bir plaka kapağı gibi steril bir yüzeye iki cömertçe boyutlandırılmış sığır fibronektini noktası dökün. Noktaların tüm ızgarayı saracak kadar büyük olduğundan emin olun.
Daha sonra, beş x 15 cımbız alın ve ızgaranın her iki tarafına fibronektin yapışma solüsyonu uygulayın. Sığır fibronektini ile tedavi edildikten sonra, ızgara yapışkan hale gelecektir. Izgaranın karbon olmayan yüzeyine, altı oyuklu bir plakadaki boş bir kuyunun dibine hafifçe dokunun ve ızgarayı yeni yüzeye tutturmak için cımbızı serbest bırakın.
Daha sonra, ızgarayı fibronektin yapışma çözeltisinde 30 dakika inkübe edin. Izgaraların kurumasını önlemek için, her 15 dakikada bir mikro pipet kullanarak ızgaraların üzerine bir ila iki damla yapışma solüsyonu ekleyin. İnkübasyonun ardından, fazla yapışma solüsyonunu bir mikro pipet ile çıkarın.
Mikro pipeti iki ila üç kez kullanarak doğrudan ızgaraların üzerine PBS damlaları ekleyerek ızgaraları yıkayın. Izgaraları UV ışığı altında bir biyogüvenlik kabininde bir saat sterilize edin. Maksimum sterilizasyon için ızgaraları UV'ye mümkün olduğunca yakın konumlandırın.
Her 10 dakikada bir ızgaranın üzerine bir ila iki damla PBS damlatarak sterilizasyon sırasında ızgaraların kurumasını önleyin.
