먼저 수집된 뇌혈전 샘플을 핀셋을 사용하여 깨끗한 접시에 담습니다. 그런 다음 피펫을 사용하여 생리식염수 5ml를 넣고 접시를 부드럽게 흔듭니다. 피펫을 사용하여 식염수를 제거합니다.
가위를 사용하여 혈전을 작은 조각으로 자릅니다. 다시 한 번, 혈전에 생리식염수 5mL를 넣고 접시를 부드럽게 흔든 후 피펫으로 식염수를 흡입합니다. 그런 다음 핀셋을 사용하여 혈전 조각을 새롭고 깨끗한 U-플레이트로 옮깁니다.
생리적인 식염수를 사용하여 2, 밀리리터 당 000 단위에 SFE의 농도를 조정해서 SFE 작동 해결책을 준비하십시오. 300 마이크로리터의 SFE 작업 용액을 전처리된 혈전에 첨가합니다. 첫 번째 분해를 시작하려면 SFE와 혈전의 혼합물을 섭씨 37도에서 30분 동안 배양합니다.
그런 다음 부드럽게 흔들어 SFE 처리된 샘플을 혼합합니다. 그리고 깨끗한 피펫을 사용하여 액체 부분을 멸균 튜브로 옮깁니다. 또 다른 분해를 위해 남은 혈전을 따로 보관하십시오.
수집된 액체를 섭씨 4도에서 5분 동안 200G로 원심분리합니다. 다음으로, 피펫을 사용하여 상층액 또는 회수된 SFE 용액을 다른 깨끗한 튜브로 옮깁니다. 생성된 세포 펠릿을 50마이크로리터의 생리식염수에 부드럽게 혼합하여 재현탁시킵니다.
그런 다음 이전에 설명한 대로 회수된 SFE 용액을 사용하여 나머지 혈전에 대한 후속 분해를 수행합니다. 각 분해 라운드에서 세포 혼합물을 수집하여 혈액 세포 샘플을 준비합니다. 얻어진 세포 샘플 5마이크로리터를 폴리-L-라이신 코팅된 유리 슬라이드에 추가합니다.
그리고 커버 슬립을 사용하여 세포를 문지릅니다. 액체가 실온에서 증발하도록 하십시오. 세포 염색을 수행하려면 100 마이크로리터의 권리 염료를 세포 도말에 부드럽게 첨가합니다.
깨끗한 물로 염료를 부드럽게 헹구기 전에 실온에서 30분 동안 세포를 염색합니다. 마지막으로 광학 현미경을 사용하여 염색된 세포를 검사합니다. 무색의 작용액을 가진 조밀한 적혈구는 분해의 초기 단계에서 관찰되었다.
30분 배양 후 혈전 용해가 관찰되었고, 최대 5시간의 장시간 배양으로 대부분의 혈전이 용해된 반면, 10시간 배양 후에도 음성 대조군에서는 유의한 변화가 없었다. 올바른 염색 후 성숙한 적혈구, 혈소판 및 다양한 과립구를 광학 현미경으로 명확하게 식별할 수 있었습니다. 세포 성분은 자가혈액학의 도움으로 성공적으로 정량적으로 분석될 수 있었습니다.