Для начала поместите вырезанные кусочки плацентарных образцов в ПБС. Выбросьте из образца хорионическую пластинку, материнский децидуа и любые видимые инфаркты. Оставшийся образец ткани рассекают на ворсинчатые экспланты диаметром поперечного сечения около 0,5 сантиметра.
Переложите экспланты в чашку Петри, наполненную свежим PBS. С помощью щипцов встряхните каждый эксплант в PBS, чтобы удалить всю кровь. Под стерильным колпаком используйте замки Люэра, чтобы соединить пять камер с резервуарной бутылкой.
Переверните камеры вверх дном и снимите дно. Теперь с помощью щипцов поместите металлические пластины по центру в верхних частях камер булавками вверх. Заполните половину камер одним миллилитром предварительно подогретой питательной среды.
Добавьте в резервуар еще 20 миллилитров средства. Щипцами осторожно поместите ворсинчатый эксплант на иглы металлической пластины в камере. Поместите четыре экспланта в одну камеру.
Снова прикрепите нижнюю часть камеры, чтобы закрыть ее. Затем подсоедините трубку насоса к насосу, чтобы соединить проточный контур с перистальтическим насосом внутри биореактора. Зафиксируйте его на четвертом этапе.
В меню «Насосы» выберите «Ручной режим». Отрегулируйте скорость насоса до одного миллилитра в минуту и нажмите «Выполнить», чтобы начать сцеживание. Держите камеры под углом во время наполнения, чтобы обеспечить полное наполнение.
Когда процесс наполнения будет завершен, снова переверните камеру. Убедитесь, что камеры надежно закреплены, и закройте обе крышки биореактора. После завершения инкубации тканей нажмите кнопку Прервать, чтобы остановить помпу.
Одновременно открывайте две крышки биореактора и одну проточную камеру. С помощью щипцов осторожно удалите экспланты с металлической пластины для дальнейшего анализа. Иммуногистохимически окрашенные экспланты показали хорошо структурированное и организованное визуальное представление цитоскелета в свежей и проточной культуре.
Со временем в статических эксплантах все чаще наблюдалась агрегация микрофиламентов, что свидетельствует о деградации структуры цитоскелета. Снижение целостности тканей за время культивирования было подтверждено констатированием гематоксилина и эозина. Свежие ткани показали плотную и плотно упакованную строму.
Через 48 часов проточной культуры были замечены частично отслоившиеся фрагменты синцитиотрофобласта. Целостность тканей была неадекватно сохранена уже через 24 часа в условиях статической культуры, которая еще больше ухудшилась через 48 часов. Окрашивание эндотелиальных клеток показало отчетливо организованные клетки в свежей ткани.
Морфологическая целостность сохранялась даже через 48 часов в проточных культурах. Статический эксплант, однако, продемонстрировал частичное разрушение даже через 24 часа, которое еще больше ухудшилось через 48 часов.
