Name: Analyzing Protein Expression in Salidroside Treated MCF-7 Cells by Western Blotting (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-06-09T12:20:00
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analyzing protein expression in salidroside treated mcf-7 cells by western blotting

Exploring the Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Salidroside in Inhibiting MCF-7 Cell Proliferation and Migration

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Analyzing Protein Expression in Salidroside Treated MCF-7 Cells by Western Blotting (Video) | JoVE 

Análise da Expressão Proteica em Células MCF-7 Tratadas com Salidrosídeo por Western Blotting

Comece adicionando dois mililitros de células MCF-7 contendo diferentes drogas nos poços de uma placa de seis poços. Incubar as culturas celulares durante 24 horas a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Colher as células por centrifugação a 560 x g durante três minutos a quatro graus Celsius.Em seguida, lave as células duas vezes com PBS pré-resfriado, centrifugando a 560 x g por três minutos entre as lavagens. Adicionar 50 microlitros de tampão de lise às células lavadas e colocar a amostra em banho de gelo por 15 minutos. Em seguida, centrifugar a amostra a 8, 550 x g por 10 minutos a quatro graus Celsius, e coletar a amostra de proteína sobrenadante.Combinar a amostra de proteína com o tampão de carga numa proporção de quatro para um. Em seguida, desnature a mistura a 100 graus Celsius por 10 minutos em um banho de metal. Em seguida, resfriar a mistura em temperatura ambiente.Separe a amostra de proteína usando eletroforese em gel de poliacrilamida SDS a 10%. Transfira as proteínas para uma membrana PVDF de 0,22 micrômetro. Depois de bloquear a membrana com 5% de BSA, incubá-la com os anticorpos primários correspondentes durante a noite a quatro graus Celsius.No dia seguinte, incubar a membrana com anticorpo secundário IgG de cabra anti-coelho a 37 graus Celsius por duas horas. Em seguida, desenvolva as membranas usando uma solução de quimioluminescência ECL e capture as imagens usando um sistema de imagem Western blot quantitativo sem contato. O tratamento com salidrósido promoveu a expressão proteica dos fatores pró-apoptóticos CC-9, CC-7, CC-3, Bim e Bax enquanto inibiu a expressão proteica do antiapoptótico BCL-2.O salidrosídeo limitou proeminentemente as proporções de p-PI3K para PI3K e p-AKT para AKT. Enquanto isso, a expressão proteica de mTOR, HIF-1 alfa e Fox01 também foi notavelmente suprimida.

Research

JoVE Journal

Medicine

Analyzing Protein Expression in Salidroside Treated MCF-7 Cells by Western Blotting

Salidroside's Mechanism in Suppressing MCF-7 Cell Migration and Proliferation

Exploring Salidroside's Molecular Mechanisms in Breast Cancer Treatment (Video) | JoVE

Explorando a Ação Farmacológica e o Mecanismo Molecular do Salidrosídeo na Inibição da Proliferação e Migração de Células MCF-7

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer ...

Medicina

Evaluating the Migration and Invasion of Salidroside Treated MCF-7 Cells in a Wound Scratch Assay

Evaluating the Migration and Invasion of Salidroside Treated MCF-7 Cells in a Wound Scratch Assay (Video) | JoVE 

Avaliação da migração e invasão de células MCF-7 tratadas com salidrósido em um ensaio de arranhão de ferida

Determining Na+-K+-ATPase and Ca2+-Mg2+-ATPase Activity in Salidroside Treated MCF-7 Cells

Determinação da atividade da Na+-K+-ATPase e Ca2+-mg2+-ATPase em células MCF-7 tratadas com salidrósido

Flow Cytometry Analysis of Apoptosis and the Cell Cycle in Salidroside Treated MCF-7 Cells

Flow Cytometry Analysis of Apoptosis and the Cell Cycle in Salidroside Treated MCF-7 Cells (Video) | JoVE 

Análise por citometria de fluxo da apoptose e do ciclo celular em células MCF-7 tratadas com salidrósido

DCFH-DA and Fluo-4 AM Fluorescence Staining of Salidroside Treated MCF-7 Cells

DCFH-DA and Fluo-4 AM Fluorescence Staining of Salidroside Treated MCF-7 Cells (Video) | JoVE 

DCFH-DA e Fluo-4 AM Coloração por Fluorescência de Células MCF-7 Tratadas com Salidrósido

Determining Gene Expression in Salidroside Treated MCF-7 Cells Using qRT-PCR

Determining Gene Expression in Salidroside Treated MCF-7 Cells Using qRT-PCR (Video) | JoVE 

Determinação da Expressão Gênica em Células MCF-7 Tratadas com Salidrosídeo Usando qRT-PCR