Determining Gene Expression in Salidroside Treated MCF-7 Cells Using qRT-PCR

MCF-7 세포를 섭씨 4도에서 560-G에서 3분 동안 원심분리하여 수확합니다. 완충된 RL-1 500마이크로리터를 6개의 세포에 5배 10을 넣고 세포 덩어리가 보이지 않을 때까지 완전히 혼합합니다. 다음으로, 세포 균질액을 수집 튜브에 내장된 DNA 세척 컬럼으로 옮깁니다.

샘플을 섭씨 4도에서 2분 동안 85-50G로 원심분리합니다. 원심분리 후 DNA 세척 컬럼을 제거하고 수집 튜브에 상층액을 유지합니다. 800 마이크로리터의 완충액 RL-2와 500 마이크로리터의 상층액을 넣고 부드럽게 섞습니다.

다음으로, 혼합물 700마이크로리터를 수집 튜브에 내장된 RNA 전용 컬럼으로 옮깁니다. 튜브를 섭씨 4도에서 8, 550-G에서 1분 동안 원심분리합니다. 그런 다음 수집 튜브의 플로우 스루를 버리십시오.

RNA 전용 컬럼을 먼저 500mL의 완충액 RW-1로 세척한 다음 700mL의 완충액 RW-2로 세척할 때마다 섭씨 8, 550-G, 섭씨 4도에서 1분 동안 원심분리하여 세척합니다. 다시 원심분리하여 잔류 RW-2를 제거한 후 RNA 전용 컬럼을 새 수집 튜브로 옮깁니다. 섭씨 65도에서 예열된 RNA가 없는 탈이온수 100마이크로리터를 RNA 전용 컬럼의 멤브레인 중앙에 넣고 2분 동안 기다립니다.

그런 다음 섭씨 4도에서 8, 550-G에서 1분 동안 원심분리하여 RNA 용액을 수집합니다. PCR에 대한 반응 혼합물을 설정한 후 시스템의 PCR 반응 조건을 설정합니다. QRT PCR 프로시저를 실행합니다.

QRT PCR은 원통형 처리가 세포사멸 촉진 인자인 CC-9, CC-7, CC-3, vim, vax의 유전자 발현을 촉진하는 반면, 항세포사멸 BCL-2의 유전자 발현을 억제하는 것으로 나타났다. 또한, 원통형 살충제 투여는 PI-3K, AKT, M-tor, HIF1-Alpha 및 Fox-01의 유전자 발현 수준을 감소시켰다.