dextran-fitc injection and matrix gel plug collection from mouse for matrix gel plug assay

Modified In Vivo Matrix Gel Plug Assay for Angiogenesis Studies

Iniezione di destrano-FITC e raccolta di spine in gel a matrice dal topo per il saggio a spina di gel a matrice

Per iniettare il topo con destrano, FITC sette giorni dopo l'iniezione del gel della matrice, SOSPENDERE 0,5 milligrammi di destrano, FITC in 500 microlitri di acqua bidistillata. Vorticarlo accuratamente per ottenere una soluzione di destrano da un microgrammo per microlitro. Riempire una siringa calibro 29 con 50 microlitri della soluzione Dextran FITC.Fissare il topo sullo strumento per l'iniezione della vena caudale, disinfettare la coda con un batuffolo di cotone imbevuto di alcol al 75% prima di iniettare con cautela 50 microlitri della soluzione Dextran FITC nella siringa nella vena caudale. Applicare una pressione sul sito di iniezione con il batuffolo di cotone per un minuto per arrestare l'emorragia. Rimetti il topo nella sua gabbia e lascialo rilassare per 30 minuti prima di raccogliere il tappo di gel della matrice.Per raccogliere il tappo di gel, tagliare la pelle del topo sottoposto a eutanasia lungo il bordo contrassegnato del tappo, usando delle forbici chirurgiche. E rimuovere la pelle sopra il tappo di gel della matrice. Raccogliere il tappo e sciacquarlo in un becher con soluzione salina tamponata con fosfato per lavare via il sangue in eccesso.Successivamente, coprire il fondo della cassetta di inclusione del tessuto con circa 0,5 millilitri di gel di inclusione del tessuto. Quindi posizionare rapidamente il tappo in gel a matrice sul gel di inclusione del tessuto nell'orientamento pianificato. Incorporare il tappo con gel aggiuntivo per l'inclusione dei tessuti.Solidificare le cassette a meno 80 gradi Celsius per 12 ore. Dopo aver rimosso il blocco del tappo solidificato, tagliare sezioni spesse 12 micron utilizzando un microtomo congelante. Quindi montare le sezioni su vetrini da microscopio.

Research

JoVE Journal

Biology

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Ricerca

Biologia

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