Name: Isothermal Titration Calorimetry for Evaluating PROTACS-Induced Ternary Complex Formation (Video) | JoVE
Uploaded: 2024-01-12T13:00:00
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isothermal titration calorimetry for evaluating protacs-induced ternary complex formation

The Development and Application of Biophysical Assays for Evaluating Ternary Complex Formation Induced by Proteolysis Targeting Chimeras (PROTACS)

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Isothermal Titration Calorimetry for Evaluating PROTACS-Induced Ternary Complex Formation (Video) | JoVE 

Calorimetría de titulación isotérmica para evaluar la formación de complejos ternarios inducidos por PROTACS

Para empezar, prepare soluciones para la célula, la jeringa y para la limpieza. Agregue muestras de proteínas o tampones a tres pocillos consecutivos en una placa de 96 pocillos. Ahora agregue 100% DMSO en consecuencia para que la concentración final sea del 2%Ejecute las cuatro valoraciones en el microcalorímetro.Cada valoración debe consistir en una inyección inicial de 0,4 microlitros de proteína a dos microlitros por segundo, seguida de 19 inyecciones de solución de jeringa de 2 microlitros a razón de 2 microlitros por segundo a intervalos de 120 segundos para un total de 20 inyecciones. Ejecute todos los experimentos a 25 grados centígrados mientras agita a 600 RPM. Para el análisis de datos, ajuste los datos a un único modelo de sitio de unión para obtener la estequiometría n, la constante de disociación y la entalpía de unión.Se realizó la caracterización del complejo binario BVS MZ1 y del complejo BVS MZ1 Brd4. Se observó una cooperatividad positiva.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Isothermal Titration Calorimetry for Evaluating PROTACS-Induced Ternary Complex Formation

Characterization of Ternary Complex Formation in PROTACs Using Biophysical Assays

Evaluating Biophysical Assays for Characterizing PROTACS Ternary Complexes (Video) | JoVE

Desarrollo y Aplicación de Ensayos Biofísicos para la Evaluación de la Formación de Complejos Ternarios Inducida por Quimeras Dirigidas a la Proteólisis (PROTACS)

E3 ligases and proteins targeted for degradation can be induced to form complexes by heterobifunctional molecules in a multi-step process. The kinetics ...

Investigación

Bioquímica

Biolayer Interferometry (BLI) for Evaluating PROTACS-Induced Ternary Complex Formation

Biolayer Interferometry (BLI) for Evaluating PROTACS-Induced Ternary Complex Formation (Video) | JoVE 

Interferometría de biocapas (BLI) para evaluar la formación de complejos ternarios inducidos por PROTACS

Surface Plasmon Resonance (SPR) for Evaluating PROTACS-Induced Ternary Complex Formation

Surface Plasmon Resonance (SPR) for Evaluating PROTACS-Induced Ternary Complex Formation (Video) | JoVE 

Resonancia de plasmón de superficie (SPR) para evaluar la formación de complejos ternarios inducidos por PROTACS