Name: A Step-by-Step Guide for Seeding and Differentiation of Mesenchymal Stem Cell Cultures for Characterization (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-11-10T14:30:00
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a step-by-step guide for seeding and differentiation of mesenchymal stem cell cultures for characterization

Single-Cell Sorting of Immunophenotyped Mesenchymal Stem Cells from Human Exfoliated Deciduous Teeth

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A Step-by-Step Guide for Seeding and Differentiation of Mesenchymal Stem Cell Cultures for Characterization (Video) | JoVE 

Una guía paso a paso para la siembra y diferenciación de cultivos de células madre mesenquimales para su caracterización

Para empezar, siembre células madre mesenquimales en matraces T-75, placas de 100 mm y dos placas de 48 pocillos para todos los experimentos. Agregue 200 microlitros de medios de cultivo al 10% de MSC a los pocillos de las placas de 48 pocillos. Cuando la monocapa celular alcance el 90 % de confluencia, reemplace el medio existente de los pocillos de control designados con un medio de suero al 2 %.Agregue medios de diferenciación de linaje adipogénico u osteogénico en los dos últimos pocillos etiquetados como Prueba. El mismo día, tripsinice una placa confluente de 100 mm y transfiera la suspensión celular a dos tubos de 15 mililitros etiquetados. Centrifugar los tubos a 300 x g durante seis minutos.A continuación, pipetee 2 mililitros de los medios respectivos en los tubos de control y ensayo. Coloque los tubos con tapa suelta en la incubadora a 37 grados centígrados bajo un 5% de dióxido de carbono durante 21 días con reemplazo de medios cada tres días. Los SHEDs se caracterizaron con ensayos de inmunofluorescencia estándar, mostrando la expresión de vimentina, filamentos de actina y núcleos teñidos con DAPI.Los ensayos de crecimiento celular a corto plazo mostraron un aumento de la tasa de proliferación desde el segundo día hasta el octavo día. El ensayo de la unidad formadora de colonias y la tinción con violeta cristalino confirmaron la capacidad formadora de colonias de los SHEDs después de 14 días.

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JoVE Journal

Biology

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Clasificación unicelular de células madre mesenquimales inmunofenotipadas de dientes deciduos exfoliados humanos

The mesenchymal stem cells (MSCs) of an organism possess an extraordinary capacity to differentiate into multiple lineages of adult cells in the body and ...

Investigación

Biología

Lineage-Specific Cytochemical Staining of Mesenchymal Stem Cells for Characterizing Differentiated Cells

Lineage-Specific Cytochemical Staining of Mesenchymal Stem Cells for Characterizing Differentiated Cells (Video) | JoVE 

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