Name: Mesenchymal Stem Cell Sample Preparation, Flow Cytometric Analysis, and Cell Sorting (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-11-10T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mesenchymal Stem Cell Sample Preparation, Flow Cytometric Analysis, and Cell Sorting at JoVE.com

mesenchymal stem cell sample preparation, flow cytometric analysis, and cell sorting

Single-Cell Sorting of Immunophenotyped Mesenchymal Stem Cells from Human Exfoliated Deciduous Teeth

Watch this Scientific Journal Video about Mesenchymal Stem Cell Sample Preparation, Flow Cytometric Analysis, and Cell Sorting at JoVE.com

Mesenchymal Stem Cell Sample Preparation, Flow Cytometric Analysis, and Cell Sorting (Video) | JoVE 

Mesenchymale stamcelmonstervoorbereiding, flowcytometrische analyse en celsortering

Label om te beginnen twee nieuwe faxbuizen als gemengde buizen één en twee. Bereid de cel- en antilichaamsuspensie voor volgens de gegeven tabel voor flowcytometrische analyse. Nadat u de buisjes 30 minuten hebt geïncubeerd, wast u elke buis twee keer met één milliliter kleurbuffer.Centrifugeer de vortexbuizen bij 200 G gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Breng de pellet vervolgens opnieuw in suspendeer in 500 microliter kleurbuffer. Smeer de putjes van een bord met 48 putjes in met 200 tot 500 microliter FBS en bewaar ze een uur.Vervolgens pipetteer 200 tot 500 microliter 10%MSC-media na het verwijderen van de resterende FBS. Om de monsters voor te bereiden op het sorteren van eencellige cellen, pipetteer u een milliliter FBS in twee nieuwe faxbuizen. Rol de buizen om een gelijkmatige laag FBS op het binnenoppervlak van de buis te creëren.Bereid de cel- en antilichaamsuspensie voor in gemengde buizen één en twee, volgens de tabel, voor het sorteerexperiment. Incubeer de buisjes vervolgens 30 minuten in het donker bij kamertemperatuur. Centrifugeer de buisjes na het wassen met kleurbuffer gedurende 10 minuten op 200 G bij kamertemperatuur.Breng de pellet vervolgens opnieuw in 500 microliter kleurbuffer en incubeer gedurende 15 minuten in vijf microliter DAPI voordat u hem sorteert. Om de compensatiematrix in te stellen, gebruikt u de enkele vlekcompensatiebuizen. Klik op experiment in de werkbalk in de instrumentsoftware.Klik vervolgens op compensatie-instellingen, gevolgd door compensatie-instellingen maken. Klik vervolgens op ongekleurde buis, gevolgd door parameters in het dialoogvenster van de cytometer. Pas de spanningen aan door de waarden voor elke parameter te bewerken.Klik op laden in het acquisitiedashboard en klik vervolgens op acquire. Sleep de P-1-poort naar de celpopulatie en pas deze toe op alle compensatieregelaars om de spanning en negatieve poort voor elke parameter in te stellen. Laad nu de enkele vlekcompensatiebuizen afzonderlijk.Noteer de gegevens en sla ze op. Selecteer het huidige experiment, klik er met de rechtermuisknop op en selecteer compensatiewaarden berekenen, gevolgd door koppelen en opslaan. Voer de gemengde buis één uit en registreer 10.000 cellen.Stel de poorten in op de populatie van belang die moet worden gesorteerd met de juiste poortstrategie. Plaats vervolgens een verzamelplaat in het instrument en stel een doelcelnummer in, variërend van 2.500 tot 5.000 cellen per put. Selecteer vervolgens het sorteerzuiverheidsmasker voor één cel.Verzamel de gesorteerde celpopulaties in een verzamelapparaat en bewaar ze op ijs voor de duur van het sorteerexperiment. Verplaats ten slotte de platen naar een incubator van 5% kooldioxide om de culturen op 37 graden Celsius te houden. De multiparametrische flowcytometrie-assaysplots toonden geen expressie van het FITC-isotype van CD 90 FITC-antilichamen.De positieve expressie van de markers CD-90 en CD-73 en de negatieve expressie van CD-45 zijn vergelijkbaar met die van hun ongekleurde en FMO-controles. De immunofenotypes toonden de markerverdeling van een van de vroege passages met de door ISCT aanbevolen markers en CD-44, waarbij de ouderpopulaties als MSC's werden bepaald. De late doorgangsloodsen werden gebruikt voor het sorteren van eencellige hoge en zwakke expressoren.De postgesorteerde cellen die in de plaat met 48 putjes werden verzameld, vertoonden hechting en proliferatie, net als hun ouderpopulatie. De postgesorteerde cellen differentieerden in aanwezigheid van adipogene groeifactoren.

Research

JoVE Journal

Biology

Mesenchymal Stem Cell Sample Preparation, Flow Cytometric Analysis, and Cell Sorting

Fluorescence-Activated Single-Cell Sorting of Human Mesenchymal Stem Cells

Importance of Single Cell Sorting in Isolating Purified Populations of Mesenchymal Stem Cells (Video) | JoVE

Eencellige sortering van immunofenogetypeerde mesenchymale stamcellen van menselijke geëxfolieerde bladverliezende tanden

The mesenchymal stem cells (MSCs) of an organism possess an extraordinary capacity to differentiate into multiple lineages of adult cells in the body and ...

A Step-by-Step Guide for Seeding and Differentiation of Mesenchymal Stem Cell Cultures for Characterization

A Step-by-Step Guide for Seeding and Differentiation of Mesenchymal Stem Cell Cultures for Characterization (Video) | JoVE 

Een stapsgewijze handleiding voor het zaaien en differentieren van mesenchymale stamcelculturen voor karakterisering

Lineage-Specific Cytochemical Staining of Mesenchymal Stem Cells for Characterizing Differentiated Cells

Lineage-Specific Cytochemical Staining of Mesenchymal Stem Cells for Characterizing Differentiated Cells (Video) | JoVE 

Afstammingsspecifieke cytochemische kleuring van mesenchymale stamcellen voor het karakteriseren van gedifferentieerde cellen

Mesenchymal Stem Cell Surface Staining for Immunophenotyping

Mesenchymal Stem Cell Surface Staining for Immunophenotyping (Video) | JoVE 

Mesenchymale stamceloppervlaktekleuring voor immunofenotypering