Name: Removal of Debris and Red Blood Cells from CNS Cell Suspension of EAE Mice (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-10-06T13:40:00
Duration: 1 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Removal of Debris and Red Blood Cells from CNS Cell Suspension of EAE Mice at JoVE.com

removal of debris and red blood cells from cns cell suspension of eae mice

Simultaneous Isolation of Principal Central Nervous System-Resident Cell Types from Adult Autoimmune Encephalomyelitis Mice

Watch this Scientific Journal Video about Removal of Debris and Red Blood Cells from CNS Cell Suspension of EAE Mice at JoVE.com

Removal of Debris and Red Blood Cells from CNS Cell Suspension of EAE Mice (Video) | JoVE 

Rimozione di detriti e globuli rossi dalla sospensione delle cellule del sistema nervoso centrale dei topi EAE

Per iniziare, ottenere un pellet cellulare dopo la dissociazione del tessuto del SNC e risospenderlo con 3.100 microlitri di DPBS in una provetta da 15 millilitri. Non vorticare. Aggiungere 1.800 microlitri della soluzione per la rimozione dei detriti dal kit di dissociazione cerebrale per adulti a due sospensioni di cellule del SNC raggruppate.Capovolgere il tubo e mescolare la sospensione, quindi sovrapporla delicatamente con 4 millilitri di DPBS freddo e osservare un chiaro gradiente. Centrifugare le provette per 10 minuti a 3.000 g a 4 gradi Celsius con la massima accelerazione e senza interruzioni. Dopo la centrifugazione, si formano tre fasi.Aspirare completamente le due fasi superiori e scartarle, assicurandosi che non rimangano residui di mielina. Riempire il tubo con DPBS freddo fino a 14 millilitri e chiuderlo. Capovolgere il tubo con forza sul banco di lavoro fino a quando il pellet cellulare non si stacca dal fondo del tubo.Centrifugare il campione e aspirare completamente il surnatante. Per la rimozione dei globuli rossi, aggiungere 1 millilitro della soluzione di rimozione dei globuli rossi al pellet cellulare. Dopo aver risospeso il pellet, incubare la soluzione per 10 minuti a 4 gradi Celsius.Quindi aggiungere 10 millilitri di tampone PB freddo, centrifugare il campione e aspirare completamente il surnatante. Per la conta cellulare, diluire la sospensione cellulare di 50 volte in tampone PB e poi di 1-10 diluizioni in soluzione di blu di tripano allo 0,4%. Quindi determinare il conteggio delle cellule, utilizzando una camera di conteggio migliorata.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Removal of Debris and Red Blood Cells from CNS Cell Suspension of EAE Mice

Isolating All CNS Resident Cell Types Simultaneously from Autoimmune Mice

Studying Neuroinflammatory Pathways Through Simultaneous Isolation of All Main CNS-Resident Cell Types (Video) | JoVE

Isolamento simultaneo dei principali tipi di cellule residenti nel sistema nervoso centrale da topi adulti con encefalomielite autoimmune

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common murine model for multiple sclerosis (MS) and is frequently used to further elucidate ...

Ricerca

Neuroscienze

Preparation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

Preparation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice  (Video) | JoVE 

Preparazione del tessuto del SNC per l'isolamento delle cellule nei topi EAE 

Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

Dissociation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice  (Video) | JoVE 

Dissociazione del tessuto del SNC per l'isolamento delle cellule nei topi EAE 

Isolation of CNS Cell Types Using Magnetic Beads in Naive and EAE Mice

Isolation of CNS Cell Types Using Magnetic Beads in Naive and EAE Mice (Video) | JoVE 

Isolamento di tipi di cellule del SNC utilizzando microsfere magnetiche in topi naive e EAE