For å begynne med, tilsett 500 mikroliter varm kulturgel til en brønn i en 24-brønnplate. Overfør raskt de dissekerte hele snittene isolert fra musen til brønnen. Virvle platen et par ganger for å skylle fortennene.
Tilsett 400 mikroliter varm kulturgel i en kulturskål og overfør de skyllede fortennene til parabolen. Orienter snittet for å plassere cervikalsløyfeområdet i midten av parabolen og juster hellingen på det apikale snittet for ønsket bildeplan. Når gelen er satt, fjerner du eventuelle geler på toppen av interesseområdet ved hjelp av et par fine tanger.
Tilsett ca. 150 mikroliter varmt kulturmedium mot kanten av fatet for å dekke prøven. Plasser eksplantkulturen ved 37 grader Celsius for å la vevet sette seg. Etter en time, slå på mikroskopet og to-foton laseren.
Fest kulturfatet til sceneadapteren og plasser blodadapterringen på toppen. Koble sceneadapteren til en temperaturregulator for å opprettholde kulturen ved 37 grader Celsius. Koble innløpet og utløpet til adapterringen til en mikroprofusjonspumpe.
Sett overflodshastigheten til 20 og start overflod av mediet over prøven. Plasser en ACBR på toppen av adapterringen og løft scenen slik at målet passer gjennom ACBR for å komme i kontakt med kulturmediet. Vri laserbølgelengden til 920 nanometer for å visualisere GFP.
Etter å ha funnet prøven gjennom et okular, visualiser det med et mikroskopprogramvare, og sett deretter opp Z-trinnstørrelse på fire mikrometer og et tidsintervall på fem minutter i 14 timer. Start intervallavbildningen og lagre de påfølgende filene for nedstrøms dataanalyse. I time-lapse-mikroskopi av K14-Cre; R26-rtTA; tetO-H2B-GFP cervikal sløyfe, ble H2B-GFP-signalene hovedsakelig observert i den transforsterkende regionen av cervikalsløyfen, noe som indikerer aktive celledelinger.
Videre ble kondensering og justering av kromosomer ved metafaseplaten i mitotiske celler etterfulgt av deres segregering under anafase og i to datterceller observert. De fleste celledelingene var vinkelrette eller i skrå vinkel i forhold til kjellermembranen med færre horisontale inndelinger parallelt med kjellermembranen. Celledelingshendelser var også tydelige i K14-Cre; R26-mT/mG cervikale sløyfer der alle epitelcellemembraner var merket grønne.
Mitotiske celler ble identifisert ved celleavrunding og påfølgende cytokinese. I K14-Cre; R26-mT/mG cervikale sløyfer, både horisontale og vertikale celledelinger ble også observert.